雙價(jià)抗蟲轉(zhuǎn)基因水稻的育成和鑒定.pdf

1、水稻是世界上最重要的糧食作物之一，隨著人口的增加和耕地面積的減少，進(jìn)一步提高水稻產(chǎn)量有極其重要的意義。蟲害是限制水稻增產(chǎn)的主要原因之一，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育抗蟲水稻可以有效解決水稻蟲害問題。近年來，水稻抗蟲基因工程取得了很大的進(jìn)展，相繼獲得了一系列抗蟲基因工程植株。但隨著抗蟲轉(zhuǎn)基因植物的大規(guī)模種植，抗蟲譜相對(duì)狹窄及害蟲易產(chǎn)生抗性等問題也越來越受到人們的關(guān)注。因此，轉(zhuǎn)雙價(jià)或多價(jià)抗蟲基因植物成為植物抗蟲基因工程研究的熱點(diǎn)之一。
　　

2、本論文主要包括如下工作：
　　 1.采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將兩個(gè)抗蟲基因sbk和sck轉(zhuǎn)入水稻品種Dular中。通過常規(guī)PCR檢測(cè)，獲得18份去選擇標(biāo)記的轉(zhuǎn)基因陽性植株。Southern雜交分析結(jié)果表明，其中15份為單拷貝插入。對(duì)這15份單拷貝轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行RT-PCR分析，結(jié)果表明，抗蟲基因都能正常表達(dá)。同時(shí)利用Dular本身的廣親和基因(S5-n)標(biāo)記和抗條紋葉枯病基因(qSTV-11b和qSTV-11c)標(biāo)記進(jìn)行分子檢測(cè)，結(jié)

3、果表明，這15份單拷貝轉(zhuǎn)基因植株都具有廣親和基因和抗條紋基因的特征帶；與不同秈稻及粳稻配組，雜種目的結(jié)實(shí)率和條紋葉枯病及抗蟲性在田間自然發(fā)病狀況下的調(diào)查結(jié)果表明，這些單拷貝植株不但保留了廣親和性與抗水稻條紋葉枯病能力，而且抗螟蟲能力顯著提高。將抗蟲基因與廣親和基因及抗條紋葉枯病基因聚合在一起，為抗病蟲雜交稻育種提供資源基礎(chǔ)。
　　 2.用含有雙價(jià)抗蟲質(zhì)粒的農(nóng)桿菌感染南粳45的愈傷組織，再生獲得植株，通過對(duì)56個(gè)再生植株的PCR分

4、析，篩選到去選擇標(biāo)記且具有雙價(jià)抗蟲基因的陽性單株42株。通過Southern雜交分析，發(fā)現(xiàn)其中38株為單拷貝插入，3株為2個(gè)拷貝，1株為3個(gè)拷貝。對(duì)單拷貝的單株進(jìn)行RT-PCR、Bt基因檢測(cè)試紙條鑒定表明，外源基因能正常表達(dá)。人工接蟲結(jié)果也表明，轉(zhuǎn)基因株對(duì)螟蟲的毒殺效果達(dá)97％-100％。通過轉(zhuǎn)入sbk和sck雙價(jià)抗蟲基因，大大提高了南粳45的抗蟲能力。篩選出T45-2、T45-11和T45-14優(yōu)良株系。不但為粳稻抗蟲育種提供了有利資