主栽抗病品種對(duì)RSV的抗性特征和抗病轉(zhuǎn)基因水稻材料的創(chuàng)制.pdf

1、由水稻條紋病毒（Rice stripe virus，RSV）引起的水稻條紋葉枯病是目前水稻生產(chǎn)上最重要的病毒病害，由介體灰飛虱（Aodelphax striatellus Fallén，SBPH）傳播。曾分布于我國(guó)16個(gè)省市，近年來(lái)在華東稻區(qū)嚴(yán)重發(fā)生，其中以粳稻主產(chǎn)區(qū)的江蘇省發(fā)生最為嚴(yán)重，自2004年江蘇省水稻條紋葉枯病特大爆發(fā)以來(lái)，全省共有42個(gè)縣發(fā)生此種病害，波及面積達(dá)2320萬(wàn)畝，給水稻生產(chǎn)造成了巨大的損失?？共∑贩N的應(yīng)用是防治病

2、害最經(jīng)濟(jì)有效的措施。
　　 本研究重點(diǎn)進(jìn)行主栽抗病品種抗性特征的分析以及抗病毒轉(zhuǎn)基因材料的創(chuàng)制，主要研究?jī)?nèi)容包括兩大方面。一是選取江蘇地區(qū)8個(gè)主栽抗病粳稻品種，采用苗期接種鑒定、非嗜性測(cè)驗(yàn)和抗生性測(cè)驗(yàn)的方法分析品種的抗病性和抗蟲(chóng)性，二是通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將非病毒來(lái)源的2-5A系統(tǒng)基因?qū)胧荏w水稻鹽粳21中，獲得轉(zhuǎn)2-5A系統(tǒng)基因的水稻材料并對(duì)其進(jìn)行抗病毒分析。主要結(jié)果如下：
　　 1、8個(gè)主栽抗病粳稻品種徐稻3號(hào)、徐稻4號(hào)

3、、鹽稻8號(hào)、鎮(zhèn)稻88、寧粳3號(hào)、鎮(zhèn)稻99、連粳4號(hào)和鎮(zhèn)稻8號(hào)的抗病性和抗蟲(chóng)性表現(xiàn)并不一致?？共⌒苑治霭l(fā)現(xiàn)，供試品種均抗RSV；抗蟲(chóng)性分析發(fā)現(xiàn)，鎮(zhèn)稻88和鎮(zhèn)稻99表現(xiàn)為較弱的抗蟲(chóng)性，其余品種均表現(xiàn)為無(wú)抗蟲(chóng)性。這表明供試抗病品種對(duì)水稻條紋葉枯病表現(xiàn)的抗性主要來(lái)源于對(duì)病毒的抗性。
　　 2、將2-5A合成酶基因和RNase L分別克隆到載體pAMM2106和pAMM2109上，農(nóng)桿菌法轉(zhuǎn)化水稻愈傷組織，獲得轉(zhuǎn)2-5A系統(tǒng)基因水稻。設(shè)計(jì)

4、兩基因的特異性引物對(duì)轉(zhuǎn)基因植株逐代進(jìn)行PCR篩選，在T3代獲得1個(gè)編號(hào)為4的材料，PCR檢測(cè)其T4代8個(gè)株系4-1、4-2，4-3、4-4、4-5、4-6、4-7和4-8均表現(xiàn)為雙陽(yáng)性。采用Southernblot和RT-PCR進(jìn)一步分析，Southern分析表明目的基因RNaseL已經(jīng)整合進(jìn)T4代水稻基因組中，RT-PCR分析表明轉(zhuǎn)入基因在T4代轉(zhuǎn)基因水稻中能正常轉(zhuǎn)錄，故認(rèn)為目的基因已經(jīng)整合進(jìn)T4代水稻基因組中，外源基因已經(jīng)穩(wěn)定遺傳到