大豆鐵結(jié)合蛋白基因在旱稻中的轉(zhuǎn)化.pdf

1、該研究采用基因工程的手段將pGPTV-35S-fer質(zhì)粒轉(zhuǎn)入旱稻297、277品種中,以期培育含鐵量高的轉(zhuǎn)基因旱稻,提高旱稻的稻米品質(zhì),為解決人類的鐵缺乏癥提供一條方便、廉價(jià)的方法.以成熟胚和幼胚的愈傷組織為受體材料,利用基因槍法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法將大豆鐵結(jié)合蛋白基因轉(zhuǎn)入旱稻品種中.對(duì)外源基因在旱稻植株中的整合和表達(dá)情況進(jìn)行了研究,同時(shí)在轉(zhuǎn)化過(guò)程中,對(duì)影響轉(zhuǎn)化的各個(gè)因素做了進(jìn)一步的探討,從而完善了旱稻的遺傳轉(zhuǎn)化體系.愈傷組織經(jīng)過(guò)兩輪的篩

2、選后,挑取抗性愈傷組織進(jìn)行預(yù)分化、分化,最后獲得轉(zhuǎn)大豆鐵結(jié)合蛋白基因植株共86株,其中旱稻297為76株,旱稻277為10株.對(duì)轉(zhuǎn)基因再生植株進(jìn)行PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),PCR陽(yáng)性植株分別為70株和8株.對(duì)PCR陽(yáng)性植株進(jìn)一步作Southern雜交驗(yàn)證,結(jié)果絕大部分出現(xiàn)雜交信號(hào),表明大豆鐵結(jié)合蛋白基因整合到旱稻基因組中.對(duì)轉(zhuǎn)基因植株后代T1進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄PCR發(fā)現(xiàn),外源基因已經(jīng)表達(dá),并且是在種子胚乳中特異表達(dá),說(shuō)明我們使用的水稻種子儲(chǔ)藏蛋白特有的啟