大豆GmftsH基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究.pdf

1、FtsH蛋白參與PSⅡ核心蛋白D1蛋白光氧化損傷的降解，是植物抵抗光抑制，修復(fù)PSⅡ正常功能的關(guān)鍵成分之一。本實(shí)驗(yàn)室前期從大豆科豐一號的15號染色體上克隆了GmftsH基因，本研究采用花粉管通道法和農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法將GmftsH基因?qū)朐耘啻蠖怪?，為培育轉(zhuǎn)基因高光效大豆新品種提供基礎(chǔ)，獲得主要結(jié)果如下:
　　 1、采用花粉管通道法將光抑制相關(guān)基因GmftsH導(dǎo)入五個大豆栽培品種中，共轉(zhuǎn)化7550朵花，收獲3132個莢647

2、9粒T1代種子，平均結(jié)莢率為41.36％，經(jīng)潮霉素離體葉片檢測法鑒定出34株抗性苗，PCR檢測初步確定了12株抗性苗已導(dǎo)入目的基因片段，平均轉(zhuǎn)化率為0.19％。
　　 2、采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法將光抑制相關(guān)基因GmftsH導(dǎo)入大豆，獲得了4株具有潮霉素抗性的再生苗，PCR檢測初步確定了3株再生苗的基因組中導(dǎo)入了外源基因片段。
　　 3、經(jīng)檢測體系的優(yōu)化，建立了結(jié)果直觀、工作量小、周期短、非常適用于大規(guī)模篩選轉(zhuǎn)基因大豆

3、的潮霉素離體葉片檢測法，主要的操作技術(shù):取大豆植株的真葉，沿葉片主葉脈剪成兩片并切出3～4道裂口，放在潮霉素濃度為20mgL-1的檢測液的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔中，在16h光照/8h黑暗、26℃條件下培養(yǎng)，三天后觀察葉片的反應(yīng)狀況，葉片保持綠色不變黃、切口不褐化的為抗性葉片，葉片褪色變黃、切口褐化的為潮霉素非抗性葉片。
　　 4、對農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)轉(zhuǎn)化法中的種子滅菌時間和農(nóng)桿菌最佳培養(yǎng)時間進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明干燥氯氣滅菌法最佳的滅菌時