人胰島素A、B鏈基因表達(dá)載體的構(gòu)建與大豆遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、植物醫(yī)藥生物反應(yīng)器的設(shè)想是在上個(gè)世紀(jì)八十年代末提出的.由于它在理論上是一個(gè)更為簡便、廉價(jià)、安全、可靠的醫(yī)用蛋白和多肽生產(chǎn)體系,因此,自二十世紀(jì)九十年代以來它受到人們越來越多的關(guān)注.一大批醫(yī)用蛋白和多肽在植物中獲得了表達(dá),但是要應(yīng)用于商業(yè)生產(chǎn)還任重道遠(yuǎn).該研究通過分析大豆內(nèi)源蛋白和多肽密碼子使用情況,篩選大豆偏愛密碼子,人工合成了人胰島素A、B鏈基因,并經(jīng)農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化常規(guī)大豆品種"吉30",為最終人胰島素基因在大豆中的表達(dá)奠定了基礎(chǔ).主

2、要研究結(jié)果如下:1.根據(jù)大豆偏愛密碼子和GeneBank中的人胰島素A、B鏈氨基酸序列,人工合成了人胰島素A、B鏈基因.2.將人胰島素A、B鏈基因與含有超表達(dá)組成型啟動(dòng)子-CaMV35S啟動(dòng)子的質(zhì)粒載體pBI121重組構(gòu)建成植物表達(dá)載體pBI121-IN.通過電激法將pBI121-IN轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌EHA105,獲得了PCR檢測呈陽性反應(yīng)的EHA105(pBI121-IN)工程菌.3.用EHA105(pBI121-IN)工程菌液侵染大豆