GmGBL基因轉化大豆的初步研究.pdf

1、大豆(Glycinemax(L.)Merr)是人類飲食和畜禽飼養(yǎng)最重要的植物蛋白來源之一，含有人體必需的氨基酸。人類對大豆蛋白的消耗超過其它一般食品資源。盡管大豆是一種優(yōu)異的蛋白資源，但含硫氨基酸半胱氨酸(Cys)和蛋氨酸(Met)含量低，限制其營養(yǎng)價值。利用生物工程手段改良蛋白品質即提高食用大豆含硫氨基酸的含量，有效的措施之一就是對涉及硫同化路徑中的酶進行遺傳操作。胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-Lyase，CbL)是

2、甲硫氨酸生物合成路徑中參與倒數(shù)第二步反應的關鍵酶，也是半胱氨酸代謝途徑中的關鍵酶，在含硫氨基酸代謝途徑中發(fā)揮著非常重要的作用。本研究主要取得了以下研究進展:
　　 1、實驗室前人對定位于大豆3號染色體的胱硫醚β-裂解酶基因GmCBL進行了煙草功能驗證，發(fā)現(xiàn)過量表達GmCBL能提高煙草Met含量。因此本文對GmCBL重新構建了含有草丁膦抗性的植物表達載體，并用農桿菌介導子葉節(jié)的方法在大豆中進行了遺傳轉化，以期能夠得到該基因過量表達

3、的植株，進而提高含硫氨基酸含量。
　　 在此研究中，發(fā)現(xiàn)在芽誘導初期不添加篩選劑，后期添加3-6mg/L的草丁膦，在芽伸長時期減至0.5-2mg/L是比較合適的篩選壓力。針對不同受體基因型，篩選壓力不同。
　　 最后共得到轉化苗102株南農88-1，35株Jack，11株猴子毛。經過PCR檢測共獲得陽性植株16株:分別為13株南農88-1，2株Jack，1株猴子毛。
　　 2、利用花粉管通道法對一些大豆品種進行了

4、遺傳轉化，并對其后代用對應的抗性進行了田間篩選。
　　 在此研究中，發(fā)現(xiàn)得出第一對真葉期150mg/LHyg+0.10％Tween-20的組合、400mg/LKana+0.10％Tween-20的組合、150mg/LBasta+0.10％Tween-20的組合以及第一組復葉期250mg/LHyg+0.10％Tween-20的組合是比較合適的噴灑濃度。
　　 在T2代共得到抗性苗:抗潮霉素的pMDC83-GmCBL有232