GmGBL基因轉(zhuǎn)化大豆的初步研究.pdf

1、大豆(Glycinemax(L.)Merr)是人類(lèi)飲食和畜禽飼養(yǎng)最重要的植物蛋白來(lái)源之一，含有人體必需的氨基酸。人類(lèi)對(duì)大豆蛋白的消耗超過(guò)其它一般食品資源。盡管大豆是一種優(yōu)異的蛋白資源，但含硫氨基酸半胱氨酸(Cys)和蛋氨酸(Met)含量低，限制其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。利用生物工程手段改良蛋白品質(zhì)即提高食用大豆含硫氨基酸的含量，有效的措施之一就是對(duì)涉及硫同化路徑中的酶進(jìn)行遺傳操作。胱硫醚β-裂解酶(Cystathionineβ-Lyase，CbL)是

2、甲硫氨酸生物合成路徑中參與倒數(shù)第二步反應(yīng)的關(guān)鍵酶，也是半胱氨酸代謝途徑中的關(guān)鍵酶，在含硫氨基酸代謝途徑中發(fā)揮著非常重要的作用。本研究主要取得了以下研究進(jìn)展:
　　 1、實(shí)驗(yàn)室前人對(duì)定位于大豆3號(hào)染色體的胱硫醚β-裂解酶基因GmCBL進(jìn)行了煙草功能驗(yàn)證，發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)GmCBL能提高煙草Met含量。因此本文對(duì)GmCBL重新構(gòu)建了含有草丁膦抗性的植物表達(dá)載體，并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)子葉節(jié)的方法在大豆中進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，以期能夠得到該基因過(guò)量表達(dá)

3、的植株，進(jìn)而提高含硫氨基酸含量。
　　 在此研究中，發(fā)現(xiàn)在芽誘導(dǎo)初期不添加篩選劑，后期添加3-6mg/L的草丁膦，在芽伸長(zhǎng)時(shí)期減至0.5-2mg/L是比較合適的篩選壓力。針對(duì)不同受體基因型，篩選壓力不同。
　　 最后共得到轉(zhuǎn)化苗102株南農(nóng)88-1，35株Jack，11株猴子毛。經(jīng)過(guò)PCR檢測(cè)共獲得陽(yáng)性植株16株:分別為13株南農(nóng)88-1，2株Jack，1株猴子毛。
　　 2、利用花粉管通道法對(duì)一些大豆品種進(jìn)行了

4、遺傳轉(zhuǎn)化，并對(duì)其后代用對(duì)應(yīng)的抗性進(jìn)行了田間篩選。
　　 在此研究中，發(fā)現(xiàn)得出第一對(duì)真葉期150mg/LHyg+0.10％Tween-20的組合、400mg/LKana+0.10％Tween-20的組合、150mg/LBasta+0.10％Tween-20的組合以及第一組復(fù)葉期250mg/LHyg+0.10％Tween-20的組合是比較合適的噴灑濃度。
　　 在T2代共得到抗性苗:抗潮霉素的pMDC83-GmCBL有232