離子束輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)草酸氧化酶OXO基因轉(zhuǎn)化大豆成熟胚的初步研究.pdf

1、大豆是重要的糧食作物和油料作物，是世界上植物蛋白和食用油的主要來源。大豆菌核病是世界性的大豆病害，可對(duì)大豆的產(chǎn)量和品質(zhì)均造成很大危害，因此，抗病大豆的育種成為重要的研究目標(biāo)。許多致病真菌都是通過分泌草酸而使植物受到危害的，而草酸氧化酶可以把草酸分解為：H2O2和CO2降解草酸，減輕其對(duì)植物體的毒性，從而延緩病原真菌的侵染，在植物的抗病防御、抗鹽脅迫及發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用。
　　 然而，大豆基因庫有限，至今沒有發(fā)現(xiàn)抗菌核病的品

2、種，而且傳統(tǒng)育種所需時(shí)間又過長，所以隨著分子生物學(xué)的廣泛應(yīng)用和轉(zhuǎn)基因技術(shù)的日漸成熟，通過基因工程方法獲得優(yōu)良的作物品種已成為現(xiàn)階段遺傳改良更省時(shí)有效的方法。因此，通過基因工程方法調(diào)控植物體草酸氧化酶的含量，為大豆抗病的研究提供了新的方向。離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因是1989年余增亮提出來的，利用離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因可以避開大豆再生體系困難的問題，而且便于取材，打破了傳統(tǒng)方法的受限于季節(jié)的難題，便于大批量的操作，可以提高大豆抗病育種的效率。
　　

3、 本實(shí)驗(yàn)將草酸氧化酶OXO基因與綠色熒光蛋白GFP基因連接，構(gòu)建了植物表達(dá)載體并轉(zhuǎn)化大豆：
　　 1．大豆成熟種子胚土培體系的建立對(duì)影響大豆成熟種子胚土培法的各種因素進(jìn)行比較，探討總結(jié)出一套適于離子束介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因后續(xù)操作的植株培育方法。
　　 2．植物表達(dá)載體的構(gòu)建將草酸氧化酶OXO基因插入pCAMBIA3304的多克隆位點(diǎn)，成功構(gòu)建了植物雙元表達(dá)載體pCAMBIA3304—OXO，并將pCAMBIA3304—OXO轉(zhuǎn)入