農桿菌介導的幾丁質酶基因轉化唐菖蒲的研究.pdf

1、唐菖蒲是鳶尾科唐菖蒲屬多年生單子葉球根花卉，是世界著名的四大切花之一。唐菖蒲切花生產是我國花卉產業(yè)的重要組成部分。唐菖蒲切花生產中遇到的一個主要問題是病蟲害繁多，尤其是真菌性病害發(fā)病十分嚴重。　　應用抗病品種是病害防治最直接有效的方法，但唐菖蒲抗病種質資源匱乏加之常規(guī)育種周期長，使得抗病品種遠遠不能滿足生產上的需求。隨著生物技術的迅猛發(fā)展，運用基因工程手段將外源抗病基因導入植物中，為唐菖蒲抗病育種帶來了新的希望。　　本研究將抗真菌病

2、基因(幾丁質酶基因)通過農桿菌介導轉化唐菖蒲。建立了唐菖蒲高頻再生系統(tǒng)和遺傳轉化系統(tǒng)，經PCR檢測得到了PCR陽性植株。為培育唐菖蒲抗真菌病新品種奠定了基礎，為單子葉花卉植物遺傳轉化提供了理論依據。研究研究的主要內容和結果如下：　　1.建立了唐菖蒲直接分化再生系統(tǒng)和愈傷組織再生系統(tǒng)：以子球莖為外植體，在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L培養(yǎng)基上直接分化不定芽，在MS+IBA0.5mg/L培養(yǎng)基上生根；

3、以幼芽為外植體，在MS+2,4-D4.0mg/L+6BA0.5mg/L培養(yǎng)基上誘導愈傷組織，在MS+NAA0.2mg/L+6BA2.0mg/L+KT0.8mg/L培養(yǎng)基上誘導芽分化，在MS培養(yǎng)基上生根?！　?.確定了抗生素選擇壓力：載體上含有NPTⅡ選擇標記基因，使轉化植株帶有卡那霉素抗性，研究得到的卡那霉素選擇壓力為110mg/L?！　?.研究了預培養(yǎng)時間、侵染時間、共培養(yǎng)時間、共培養(yǎng)pH值四個因素對遺傳轉化的影響：對于直接分化再