農(nóng)桿菌介導(dǎo)BADH基因轉(zhuǎn)化馬鈴薯的耐鹽研究.pdf

1、本研究以馬鈴薯品種費(fèi)烏瑞它的脫毒微型薯為外植體,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將BADH耐鹽相關(guān)基因?qū)腭R鈴薯,經(jīng)PCR和Southern檢測(cè),證明BADH基因己轉(zhuǎn)入馬鈴薯基因組中。同時(shí)對(duì)遺傳轉(zhuǎn)化的影響因素激素種類與濃度、脫菌抗生素種類與濃度、共培養(yǎng)時(shí)間、篩選方式等進(jìn)行了優(yōu)化。
　　 試驗(yàn)對(duì)轉(zhuǎn)BADH基因費(fèi)烏瑞它進(jìn)行耐鹽性鑒定,結(jié)果4個(gè)轉(zhuǎn)基因株系與對(duì)照相比葉片相對(duì)含水量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性三個(gè)指標(biāo)差異顯著。主要研究結(jié)果如下:

2、>　　 1薯塊再生培養(yǎng)基確定為MS+1mg/LIAA+2mg/LZT。
　　 2農(nóng)桿菌菌液濃度為OD600=0.7,侵染時(shí)間為5min時(shí),轉(zhuǎn)化效果最佳,費(fèi)烏瑞它薯塊出芽率分別為90.00％,污染率12.50％。
　　 3共培養(yǎng)時(shí)間對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)率影響很大,薯塊最佳共培養(yǎng)時(shí)間為2d。
　　 4對(duì)脫菌抗生素的濃度進(jìn)行了比較試驗(yàn),進(jìn)口頭孢噻肟鈉對(duì)農(nóng)桿菌LBA4404菌株有效抑制濃度為200mg/L,且在有效抑制濃度下

3、對(duì)外植體無不良影響,并且可以有效抑制農(nóng)桿菌的滋生。
　　 5試驗(yàn)采用延遲一周的篩選方式,抗性選擇劑為草丁磷(PPT),結(jié)果表明薯塊芽誘導(dǎo)階段PPT濃度為5mg/L,生根階段的PPT濃度為4mg/L。
　　 6試驗(yàn)獲得抗性植株30株,經(jīng)PCR檢測(cè)有10株呈陽性,進(jìn)一步的Southern雜交出現(xiàn)4株陽性信號(hào),說明基因已經(jīng)整合到馬鈴薯基因組中。
　　 轉(zhuǎn)BADH基因費(fèi)烏瑞它后代的生物學(xué)鑒定
　　 對(duì)Southe