耐鹽基因BADH和CMO轉(zhuǎn)化玉米的研究.pdf

1、本文采用玉米常用自交系的幼胚為受體材料，對耐鹽堿基因的遺傳轉(zhuǎn)化進(jìn)行了研究，為培育出高度耐鹽堿的玉米新品種打下良好基礎(chǔ)；并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了玉米愈傷組織及苗耐鹽堿性敏感性研究，確定玉米愈傷組織及幼苗在含鹽培養(yǎng)基上臨界濃度，對已轉(zhuǎn)化的愈傷組織及幼苗進(jìn)行篩選和幾項重要生理指標(biāo)的鑒定。評價轉(zhuǎn)BADH和CMO基因玉米耐鹽堿的能力。取得的主要研究結(jié)果如下： 一、玉米遺傳轉(zhuǎn)化方法研究1.玉米耐鹽基因的農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的研究本試驗中用于轉(zhuǎn)化的抗鹽堿基因

2、為膽堿單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)。以普通玉米自交系H99和7922的胚性愈傷組織為材料，通過愈傷組織對堿性鹽的敏感性實驗，確定愈傷組織適宜選擇壓。利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將抗鹽基因?qū)胗衩鬃越幌抵校芯哭r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的優(yōu)化，探討不同的侵染時間、不同的菌液的濃度等條件對轉(zhuǎn)化效果的影響。 2.玉米耐鹽基因花粉管通道法轉(zhuǎn)化研究本實驗還采用了花粉管通道法對玉米自交系進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。將抗鹽基因轉(zhuǎn)入玉米自交系5003、春0

3、9、7922中，同時探討了不同導(dǎo)入時間、不同DNA的濃度、不同的導(dǎo)入量等對其轉(zhuǎn)化率的影響，并從中得出花粉管通道法的最佳轉(zhuǎn)化條件。用SSC溶解的質(zhì)粒，導(dǎo)入的最佳時間在早上6：00-8：30時、下午4：00-7：00時，導(dǎo)入間隔時間要在8-20小時范圍內(nèi)，并且導(dǎo)入質(zhì)粒的濃度為500μg/mL、導(dǎo)入量為200μl即可達(dá)到較高的轉(zhuǎn)化率，通過轉(zhuǎn)化植株后代的PCR-Southern雜交分析，證明了抗鹽基因已整合到受體植株的基因組中，并在后代中得以表

4、現(xiàn)。 二、玉米愈傷組織及幼苗有關(guān)耐鹽堿性生理指標(biāo)的測定所測的耐鹽性生理指標(biāo)為細(xì)胞膜透性、游離脯氨酸含量、丙二醛含量、超氧化物歧化酶活性以及過氧化物酶活性。 把玉米愈傷組織在不同鹽濃度下繼代培養(yǎng)，定期每5天測取這五項指標(biāo)，對玉米幼苗進(jìn)行澆鹽水處理，對不同濃度鹽水條件下，定期每5天測取這五項生理指標(biāo)。得到關(guān)于玉米愈傷組織及幼苗在不同鹽濃度條件下不同時期的發(fā)育規(guī)律，膜透性脯氨酸含量和丙二醛含量隨著鹽脅迫的增強在增加，且都高于無