CMO基因轉(zhuǎn)化歐美楊107的研究.pdf

1、楊樹是我國(guó)重要的樹種之一，它生長(zhǎng)速度快，易繁殖，在木材工業(yè)、紙漿業(yè)和綠化帶建設(shè)中廣泛應(yīng)用，是人工林和大面積速生商品林建設(shè)的首選樹種。 以歐美楊107離體葉片為材料，進(jìn)行葉片直接再生不定芽實(shí)驗(yàn)，建立歐美楊107穩(wěn)定高效的葉片再生體系，確立了適宜的葉片直接再生不定芽培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基。通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)首次將CMO基因轉(zhuǎn)入歐美楊107，獲得了耐鹽性顯著提高的轉(zhuǎn)基因植株。 研究結(jié)果表明，附加BA0.8mg/L，IAA0.05mg/

2、L的MS培養(yǎng)基可以高頻誘導(dǎo)不定芽的產(chǎn)生。待小芽長(zhǎng)至2-3cm時(shí)，轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基(MS+NAA0.3mg/L)上，10d后生根，繼續(xù)培養(yǎng)得到完整的植株。 本研究還分別進(jìn)行了抑菌性抗生素頭孢霉素(Cef)和選擇性抗生素卡那霉素(Km)與潮霉素(Hyg)的敏感性試驗(yàn)，結(jié)果表明Cef250mg/L即能有效抑制農(nóng)桿菌過(guò)度繁殖，葉片外植體分化未受到明顯的抑制。Km15mg/L，Hyg5mg/L可作為誘導(dǎo)葉片芽分化的臨界篩選濃度；Km20m

3、g/L可作為生根時(shí)篩選抗性植株的濃度。 在農(nóng)桿菌工程菌液中添加200μmol/L的乙酰丁香酮(As)可以顯著提高抗性芽誘導(dǎo)率。 將CMO基因?qū)霘W美楊107，經(jīng)不定芽誘導(dǎo)及生根階段的卡那霉素連續(xù)篩選，獲得了6株抗性材料，對(duì)它們做PCR及Southern雜交檢測(cè)，有1株呈陽(yáng)性，證明CMO基因成功整合到歐美楊107基因組中。 轉(zhuǎn)基因植株在經(jīng)過(guò)5天0.5﹪NaCl脅迫后，相對(duì)電導(dǎo)率為17.2﹪，而未轉(zhuǎn)基因植株為26.4