耐鹽基因膽堿單加氧酶基因和甜菜堿醛脫氫酶基因轉(zhuǎn)化大豆的研究.pdf

1、本試驗(yàn)采用吉林省大豆優(yōu)良品種的子葉節(jié)為材料建立受體系統(tǒng)，進(jìn)行耐鹽基因的遺傳轉(zhuǎn)化研究，為培育出高度耐鹽的大豆新品種打下良好基礎(chǔ)；并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了大豆子葉節(jié)及轉(zhuǎn)基因大豆幼苗的耐鹽性研究，確定了大豆子葉節(jié)在含鹽培養(yǎng)基上的最大耐受強(qiáng)度和大豆幼苗對鹽的最大耐受強(qiáng)度，依此臨界濃度對已轉(zhuǎn)化的子葉節(jié)及大豆苗進(jìn)行篩選。同時在同一鹽脅迫下，我們對轉(zhuǎn)基因大豆幼苗的生理生化指標(biāo)進(jìn)行了檢測，并與對照進(jìn)行了對比，從而鑒定和評價轉(zhuǎn)膽堿單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿

2、醛脫氫酶基因(BADH)大豆的耐鹽性。取得的主要研究結(jié)果如下： 一、大豆遺傳轉(zhuǎn)化方法研究 1.農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化研究 本試驗(yàn)中用于轉(zhuǎn)化的耐鹽基因?yàn)槟憠A單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)。以大豆品種吉農(nóng)13和吉農(nóng)17的子葉節(jié)為材料，通過利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將耐鹽基因?qū)氪蠖怪校芯哭r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的優(yōu)化條件，探討不同的侵染時間、不同的菌液的濃度等條件對轉(zhuǎn)化效果的影響。 同時對大豆子葉節(jié)的耐鹽性進(jìn)

3、行了研究，在不同鹽濃度下觀察子葉節(jié)生長狀態(tài)，并計(jì)算其成活率，從而確定大豆子葉節(jié)對鹽水的耐受強(qiáng)度，用此臨界濃度對轉(zhuǎn)基因子葉節(jié)進(jìn)行篩選，確定臨界濃度為200mmol/L。 2.大豆耐鹽基因花粉管通道法轉(zhuǎn)化研究 本實(shí)驗(yàn)還采用了花粉管通道法對大豆進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化。將耐鹽基因膽堿單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)轉(zhuǎn)入大豆品系吉農(nóng)13和吉農(nóng)17中，同時探討了不同導(dǎo)入時間、不同DNA的濃度、不同的導(dǎo)入量等對其轉(zhuǎn)化率的影

4、響，并從中得出花粉管通道法的最佳轉(zhuǎn)化條件。用SSC溶解的質(zhì)粒，導(dǎo)入的最佳時間在大豆自花授粉后的6-8小時內(nèi)，導(dǎo)入質(zhì)粒的濃度為50μg/mL、導(dǎo)入量為15μL，同時在第一次滴注外源DNA后的15min內(nèi)，需復(fù)滴一次即可達(dá)到較高的轉(zhuǎn)化率。通過轉(zhuǎn)化植株后代的Southern雜交分析，證明了耐鹽基因膽堿單加氧酶基因(CMO)和甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)已分別整合到大豆植株的基因組中，并在后代中得以表現(xiàn)。 同時對大豆幼苗的耐鹽性進(jìn)行了