四翅濱藜甜菜堿醛脫氫酶基因（BADH）的克隆及其對(duì)煙草的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、土壤鹽漬化是當(dāng)今農(nóng)業(yè)生產(chǎn)面臨的一個(gè)全球性問(wèn)題。通過(guò)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)培育耐鹽植物新品種已成為利用鹽漬土壤的研究熱點(diǎn)。四翅濱藜為藜科濱藜屬多年生常綠或準(zhǔn)常綠灌木，具有耐干旱、耐嚴(yán)寒、耐貧瘠、抗鹽堿等多種優(yōu)良特性，現(xiàn)已被廣泛用于牧場(chǎng)改良和水土保持。 本研究從四翅濱藜中獲取耐鹽基因BADH的cDNA片段，構(gòu)建其植物表達(dá)載體pBI121-BADH，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法再將其轉(zhuǎn)入模式植物煙草，并進(jìn)行PCR檢測(cè)。取得的研究結(jié)果如下： 1.采用

2、異硫氰酸胍法對(duì)四翅濱藜葉片進(jìn)行了總RNA的提取、純化，瓊脂糖凝膠電泳呈現(xiàn)了典型的28S、18S、5S三種RNA帶型，后將其反轉(zhuǎn)錄成cDNA。 2.根據(jù)GenBank中已發(fā)表的同科、同屬植物三角葉濱藜BADH的cDNA全序列，應(yīng)用Oligo6.0設(shè)計(jì)特異性引物，在5’端分別引入BamH Ⅰ和Sac Ⅰ兩個(gè)酶切位點(diǎn)，利用PCR技術(shù)獲取耐鹽基因甜菜堿醛脫氫酶基因(BADH)的cDNA片段，將其與pGEM-T Easy Vectors連

3、接后轉(zhuǎn)化E.coli DH5α，對(duì)獲得的克隆子通過(guò)PCR、酶切檢測(cè)后測(cè)序。與GenBank中同源序列進(jìn)行比對(duì)分析表明與已知BADH基因核苷酸序列同源性高達(dá)95.92％。 3.用BamHⅠ和SacⅠ雙酶切pGEM-BADH和pBI121兩種質(zhì)粒DNA，分別回收BADH基因片段和除去了Gus基因的pBI121線(xiàn)狀載體，連接、轉(zhuǎn)化、獲得重組質(zhì)粒。對(duì)重組質(zhì)粒經(jīng)PCR、BamH Ⅰ和SacⅠ雙酶切鑒定，成功構(gòu)建了CaMV35S啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)的