農(nóng)桿菌介導(dǎo)幾丁質(zhì)酶和β1，3葡聚糖酶基因遺傳轉(zhuǎn)化花生arachishypogaeal.的研究

1、福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文農(nóng)材菌介導(dǎo)幾丁質(zhì)酶和β-1，3-葡聚糖酶基因遺傳轉(zhuǎn)化花生（Arachis hypogaea L.）的研究姓名：單世華申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：作物遺傳育種指導(dǎo)教師：莊偉建2003.4.1福建農(nóng)林大學(xué)博士學(xué)位論文劃傷轉(zhuǎn)化更佳：菌液侵染時(shí)間以1 0 ～1 5 m i n 相對(duì)利于外源基因轉(zhuǎn)化。胚狀體和胚小葉再生途徑基因轉(zhuǎn)化目前僅分別得到數(shù)十粒抗性芽，需進(jìn)一步誘導(dǎo)或伸長培養(yǎng)鑒定，二者均以1 0 ～2 0 m i n 侵

2、染時(shí)間較好，共培養(yǎng)均以7 2 h r 利于得到抗性芽，并且胚軸外植體基因轉(zhuǎn)化時(shí)在體胚誘導(dǎo)伸長階段進(jìn)行K r n 篩選對(duì)提高抗性芽數(shù)量有利。子葉外植體轉(zhuǎn)化褐化現(xiàn)象較嚴(yán)重，種子的新鮮程度和品種類型對(duì)轉(zhuǎn)化有一定影響，目前僅得到1 株抗性植株需進(jìn)一步鑒定。研究發(fā)現(xiàn)，所使用的兩品種閫在不同的轉(zhuǎn)化處理中也有一定差異。針對(duì)原有攜帶質(zhì)粒載體的農(nóng)桿菌菌株對(duì)抗生素不敏感的特點(diǎn)進(jìn)行了菌株轉(zhuǎn)按，質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)入新的農(nóng)桿菌菌株后，在含適宜濃度抗生素的固／液體Y E

3、P 培養(yǎng)基皆完全被抑制，從而被成功用于本研究。為比較研究外源基因轉(zhuǎn)化情況及抗性植株生長狀況，選擇煙草品種翠碧l 號(hào)進(jìn)行相同基因轉(zhuǎn)化試驗(yàn)，P c R 檢測(cè)得到1 0 株左右陽性植株，轉(zhuǎn)化率為3 4 ～7 0 ％。研究發(fā)現(xiàn)，3 ～5 m i n 侵染時(shí)間較好，工程菌液濃度以0 D ‰為0 ．5轉(zhuǎn)化率最高。目前轉(zhuǎn)化植株已得到種子，對(duì)后代的分離情況和抗病性鑒定也隨后進(jìn)行。關(guān)鍵詞：花生，再生體系，幾丁質(zhì)酶基因，B —l ，3 一葡聚糖酶基因，農(nóng)桿