多菌靈抗性基因在角毛殼菌中的轉(zhuǎn)化.pdf

1、在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中化學(xué)農(nóng)藥的大量使用，不但成本高，污染環(huán)境，食品的安全性也受到嚴(yán)重影響。生物農(nóng)藥特別是微生物農(nóng)藥具有對人畜安全、選擇性高、對生態(tài)環(huán)境影響小、不易產(chǎn)生抗藥性等優(yōu)點(diǎn)。但是微生物農(nóng)藥不及化學(xué)農(nóng)藥作用快，在植物病害的防治中，還不能完全取代化學(xué)農(nóng)藥。未來的趨勢是采用化學(xué)農(nóng)藥與生物農(nóng)藥相結(jié)合的綜合防治體制，二者最適比例是1:1。
　　角毛殼菌（CheatomiumcupreumL.M.Ames）是一類可以抑制多種病原微生物生長，具有

2、很好生物防治效果的生物防治菌，但是對化學(xué)殺菌劑敏感，無法和化學(xué)殺菌劑在植物病害綜合防治體系中共同發(fā)揮作用。在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上，多菌靈這類苯并咪唑類化學(xué)農(nóng)藥應(yīng)用較為廣泛，所以通過對角毛殼菌進(jìn)行基因工程改造，構(gòu)建出既對苯并咪唑類殺菌劑抗性穩(wěn)定，又能顯著抑制植物病原真菌的毛殼菌基因工程菌株，具有重要意義。
　　本文以角毛殼菌為研究對象，采用多因素正交試驗(yàn)優(yōu)選法，對毛殼菌原生質(zhì)體的制備和再生條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明，將毛殼菌在PD液體培養(yǎng)基中，2

3、5℃下170rpm培養(yǎng)36h收集菌體，用pH7.0的DM溶液配制成的含有2％溶壁酶(lywallzyme)，在25℃恒溫酶解2h，原生質(zhì)體制備率最高。獲得的原生質(zhì)體經(jīng)過純化，用RA再生培養(yǎng)基培養(yǎng)獲得54.22%的再生率。這為毛殼菌的原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，獲得抗苯并咪唑類殺菌劑的毛殼菌工程菌株提供必要條件。
　　用多菌靈代表苯并咪唑類殺菌劑檢測角毛殼菌的敏感水平，結(jié)果表明多菌靈對角毛殼菌的有效抑制中濃度EC50為0.309μg/mL，而轉(zhuǎn)基