適配體二十面體納米粒介導(dǎo)的米托蒽醌肝癌靶向給藥系統(tǒng)的初步研究.pdf

1、米托蒽醌(Mitoxantrone，MX)抗腫瘤活性高，毒性小，且具有一定的趨肝性，適合作為治療肝癌的藥物。適配體與抗體相比具有高穩(wěn)定、低免疫、靶點(diǎn)多樣、靶點(diǎn)可控等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)物理法將其作為化學(xué)藥物的靶頭相比化學(xué)法更簡(jiǎn)便、環(huán)保、安全。本課題采用適配體二十面體納米粒(AS-ICO)，以物理法嵌入MX(AS-ICO-MX)，既起到載體作用（因?yàn)槎骟wICO的存在）又具有主動(dòng)靶向性（適配體AS1411特異靶向核仁素），且二十面體的結(jié)構(gòu)解決了單

2、獨(dú)的適配體不易穿透細(xì)胞膜及易被核酸酶降解的劣勢(shì)，納米級(jí)的粒徑又使其增加了被動(dòng)靶向性，使靶向效果更顯著。
　　 本課題首次組裝了AS-ICO，經(jīng)電泳驗(yàn)證組裝成功。利用原子力顯微鏡證實(shí)其結(jié)構(gòu)為二十面體。利用物理嵌入法將1600分子的MX載入到1分子的AS-ICO中。利用透射電鏡判斷出載藥后粒徑均勻，且球形形狀并未因載藥而未發(fā)生大的改變。利用激光納米粒度儀檢測(cè)AS-ICO-MX的粒徑為(206.0±29.0) nm，利于逃脫網(wǎng)狀內(nèi)皮系

3、統(tǒng)的吞噬，達(dá)到延長(zhǎng)體內(nèi)循環(huán)的特點(diǎn);PDI為0.271±0.023，反映出制備的粒子粒徑較為統(tǒng)一;zeta電位為(10.05±0.68) mV，利于與帶負(fù)電的細(xì)胞膜結(jié)合。利用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)出其對(duì)于核酸酶具有抗降解作用。體外釋放試驗(yàn)暗示了該制劑中的MX，可能只有在細(xì)胞內(nèi)的溶酶體內(nèi)才能釋放出來(lái)，即AS-ICO-MX上的MX在血循環(huán)中不會(huì)被解離下來(lái)，保證了足量的MX能到達(dá)HepG2腫瘤細(xì)胞并進(jìn)入而起到靶向治療效果，同時(shí)也暗示了其在體內(nèi)可能具

4、有緩釋作用。
　　 本課題以膜表面陽(yáng)性表達(dá)核仁素的人肝癌細(xì)胞（HepG2）及陰性表達(dá)核仁素的人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(SK-N-SH)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，利用體外細(xì)胞抑制實(shí)驗(yàn)證明了AS-ICO作為MX載體的有效性:AS-ICO-MX對(duì)SK-N-SH細(xì)胞在24 h，48 h及72 h都有部分濃度低于MX的細(xì)胞抑制率，但在48 h與72 h時(shí)對(duì)HepG2細(xì)胞的抑制率卻不比MX低;凋亡實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了AS-ICO-MX可以比MX誘導(dǎo)更多的HepG2發(fā)生

5、早期凋亡。利用激光共聚焦顯微鏡證實(shí)了AS-ICO對(duì)HepG2優(yōu)異的體外靶向性。
　　 本課題首次報(bào)道了AS-ICO作為化學(xué)藥物靶向載體的體內(nèi)研究。以荷HepG2瘤裸鼠為動(dòng)物模型，從腫瘤生長(zhǎng)曲線、腫瘤相對(duì)體積及抑瘤率方面考察了AS-ICO-MX、ICO-MX及MX的體外藥效，結(jié)果表明AS-ICO-MX在抑制體外腫瘤方面具有顯著性優(yōu)勢(shì)。對(duì)荷瘤裸鼠主要臟器進(jìn)行的HE染色切片分析暗示了AS-ICO-MX的體內(nèi)靶向性:對(duì)腫瘤部位的靶向能力

6、強(qiáng)于其他組，但對(duì)正常組織的傷害卻小于其他組。荷HepG2瘤裸鼠的活體成像圖也證明了AS-ICO-MX比ICO-MX及MX對(duì)HepG2肝癌部位具有較強(qiáng)的靶向效力，且對(duì)心臟毒性較小，減小了原料藥的毒副作用，增強(qiáng)了其在體內(nèi)循環(huán)的時(shí)間。
　　 本課題以Sprague-Dawle(SD)大鼠為動(dòng)物模型，采用HPLC測(cè)定MX在大鼠血漿中的濃度，研究AS-ICO-MX體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)。結(jié)果與MX相比，AS-ICO-MX體內(nèi)消除半衰期延長(zhǎng)了近一倍