Hsp25基因缺失致小鼠心梗后心臟破裂的相關(guān)研究.pdf

1、背景和目的：
　　小分子熱休克蛋白是一類高度保守的蛋白質(zhì)，它們廣泛表達(dá)于從細(xì)菌到人類的大多數(shù)原核和真核生物體中。熱休克蛋白25是小分子熱休克蛋白家族中的一員，在靈長類分子量為27kDa(Hsp27)，嚙齒類分子量為25kDa(Hsp25)。有研究稱Hsp27高表達(dá)能顯著縮小心肌梗死面積，改善心功能。為了進(jìn)一步研究Hsp25在心肌梗死中的作用，我們采用Hsp25基因敲除小鼠為對(duì)象，構(gòu)建了心肌梗死模型，發(fā)現(xiàn)Hsp25基因敲除后，小鼠心

2、肌梗死后心臟破裂率較野生型組顯著增高。本研究旨在進(jìn)一步探討導(dǎo)致這一現(xiàn)象的可能機(jī)制。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:Hsp25基因敲除小鼠(Hsp25 knockout mice，Hsp25 KO)由本課題組和南京大學(xué)模式動(dòng)物所共同構(gòu)建，飼養(yǎng)于南京大學(xué)模式動(dòng)物所的無特定病原體(Specific Pathogen Free，SPF)動(dòng)物房中。
　　2. Hsp25 KO小鼠基因型鑒定:1)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Polyme

3、rase Chain Reaction，PCR)檢測小鼠基因型;2)用免疫印跡法(Western blot)測定小鼠心臟Hsp25的表達(dá)水平。
　　3.模型制備:永久性結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，建立心肌梗死(Myocardial Infarction，MI)模型。
　　4.心臟功能評(píng)價(jià):MI后24h和72h，小鼠麻醉后采取仰臥位，以超聲心動(dòng)圖測定心臟左心室射血分?jǐn)?shù)(EF％)、短軸縮短率(FS％)等心功能指標(biāo)。
　　5.心肌

4、結(jié)構(gòu)改變情況
　　1)超微結(jié)構(gòu):電子顯微鏡觀察心臟切片，觀測線粒體、肌絲、肌小節(jié)等微觀結(jié)構(gòu);
　　2)熒光染色:于MI后24h收集心臟，制備冰凍切片，然后進(jìn)行纖維狀肌動(dòng)蛋白(F-actin)和球狀肌動(dòng)蛋白(G-actin)的熒光染色，觀察細(xì)胞骨架的變化情況。
　　6.細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白活性檢測:免疫印跡法檢測細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理:采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件處理，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示

5、，兩組數(shù)據(jù)比較采用T檢驗(yàn)，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析(ANOVA)，P＜0.05被設(shè)為有顯著性差異。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.野生型(WT)小鼠心肌細(xì)胞中Hsp25表達(dá)豐富，而KO小鼠心肌細(xì)胞中Hsp25表達(dá)水平顯著降低。
　　2.建立小鼠MI模型后，75％的WT小鼠存活時(shí)間超過兩周，而與WT小鼠相比，KO小鼠存活率顯著降低，在術(shù)后5天內(nèi)全部死亡，且90％死于心臟破裂。
　　3. MI后24h，KO小鼠心功能

6、較WT小鼠顯著降低。
　　4.心肌結(jié)構(gòu)改變情況:
　　1)電鏡結(jié)果顯示，MI72h后，與WT小鼠相比，KO小鼠心臟肌絲結(jié)構(gòu)更加紊亂，肌絲溶解，肌小節(jié)長度增加，線粒體空泡化嚴(yán)重。
　　2)熒光染色結(jié)果顯示，MI24h后，與WT小鼠相比，KO小鼠心肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白纖維骨架解聚程度增高，結(jié)構(gòu)紊亂。
　　5.細(xì)胞骨架相關(guān)通路蛋白檢測:與WT小鼠相比，MI24h后KO小鼠絲切蛋白活性更高。
　　結(jié)論：
　　1.