利用數(shù)字基因表達(dá)譜測序分析雞HSP25基因?qū)?xì)胞凋亡的作用.pdf

1、在哺乳動物小分子熱應(yīng)激蛋白（sHSPs）家族中，熱應(yīng)激蛋白25/27kD（HSP25/27）基因的高表達(dá)能夠主導(dǎo)聚集體沉積，防止錯誤折疊蛋白之間不可逆結(jié)合，從而緩解因內(nèi)質(zhì)網(wǎng)受協(xié)迫而造成的細(xì)胞凋亡。但卵生動物胚胎各組織中HSP25的序列和結(jié)構(gòu)都異于哺乳動物。在熱應(yīng)激條件下，雞HSP25基因（cHSP25）高表達(dá)是否也起著保護(hù)細(xì)胞的作用仍不明確。c HSP25在熱應(yīng)激誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡過程中涉及的信號通路未有報導(dǎo)，探究這些通路中的物質(zhì)變化對闡明

2、卵生動物特有的HSP25基因在細(xì)胞凋亡過程中的作用具有重要研究意義。本研究在37℃培養(yǎng)箱對雞成纖維細(xì)胞系（DF-1）分別進(jìn)行干擾和過表達(dá)cHSP25基因，通過數(shù)字基因表達(dá)譜（DGE）分析參與細(xì)胞凋亡的相關(guān)通路及相應(yīng)基因的表達(dá)情況，利用熱應(yīng)激（45℃，3 h）處理DF-1，qRT-PCR檢測相關(guān)基因和流氏細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期。結(jié)果表明：
　　（1）干擾組cHSP25基因mRNA相對表達(dá)量下降50％；過表達(dá)組cHSP25基因m

3、RNA相對表達(dá)量升高500倍。
　?。?）DGE測序分析結(jié)果揭示，與對照組相比，干擾組只有1個未注釋的下調(diào)差異表達(dá)基因；過表達(dá)組共有95個差異表達(dá)基因，其中60個為表達(dá)量上調(diào)基因，35個為下調(diào)基因。與干擾組相比，過表達(dá)組共有32個差異表達(dá)基因，其中有19個為表達(dá)量上調(diào)基因，13個為下調(diào)基因。雞DF-1過表達(dá)cHSP25后，K EGG通路分析發(fā)現(xiàn)，PPARG和 LAMA2富集于癌癥通路等；BDNF富集于嗜中性粒細(xì)胞信號通路和經(jīng)典MA

4、P激酶信號通路。
　　（3）在熱應(yīng)激處理雞DF-1后，過表達(dá)組的HSP27和HSP70基因的表達(dá)顯著下降，差異表達(dá)基因BDNF、LAMA2和PPARG及其相關(guān)通路的下游基因 AKT和NFkB的表達(dá)量顯著下調(diào)，流氏細(xì)胞術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)，S期細(xì)胞數(shù)增加，總凋亡細(xì)胞數(shù)增加。
　　綜上所述，在熱應(yīng)激條件下，雞 DF-1細(xì)胞系 cHSP25基因持續(xù)高表達(dá)促使細(xì)胞周期停滯和加劇細(xì)胞凋亡，其通過下調(diào)HSP27和HSP70基因表達(dá)，并且抑制BDN