YB1介導(dǎo)GOLPH3對腦膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲作用的研究.pdf

1、目的：研究Golgi phosphoprotein3(GOLPH3)對腦膠質(zhì)瘤細胞遷移和侵襲的影響，并探討其可能的作用機制。
　　方法：1.Western blot檢測GOLPH3和YB1蛋白在非瘤腦組織與各級別膠質(zhì)瘤組織標本中表達情況，了解GOLPH3和YB1與腦膠質(zhì)瘤發(fā)生的相關(guān)性及兩蛋白間的相關(guān)性;2.分別應(yīng)用細胞劃痕實驗和Transwell侵襲實驗檢測GOLPH3對腦膠質(zhì)瘤U251細胞遷移和侵襲能力的影響;3.Western

2、 blot檢測下調(diào)或過表達GOLPH3后，GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細胞中的水平，了解GOLPH3對YB1的調(diào)節(jié)作用;4.采用Rapamycin和INK128抑制mTOR活性后，Western blot檢測GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細胞中的水平，明確YB1是否處于mTOR的下游;5.Western blot檢測過表達GOLPH3并抑制mTOR活性后，GOLPH3和YB1在膠質(zhì)瘤U251細胞中的水平，明確抑制mTOR活

3、性是否能取消GOLPH3的作用;6.用siRNA下調(diào)YB1，檢測其對膠質(zhì)瘤細胞的侵襲遷移作用，明確是否與抑制mTOR活性以及下調(diào)GOLPH3的作用類似，并用明膠酶譜實驗檢測MMP-2活性。
　　結(jié)果：1.GOLPH3和YB1蛋白在非瘤腦組織與各級別膠質(zhì)瘤組織標本中均有表達，但腦膠質(zhì)瘤GOLPH3和YB1蛋白水平明顯高于非腫瘤腦組織，并且其水平隨著膠質(zhì)瘤惡性級別的升高而升高;兩蛋白之間存在顯著相關(guān)性;2.與陰性對照組相比，下調(diào)GOL

4、PH3后抑制腦膠質(zhì)瘤細胞的遷移和侵襲;過表達GOLPH3可促進腦膠質(zhì)瘤細胞的遷移、侵襲;3.與陰性對照組相比，下調(diào)GOLPH3抑制YB1的表達;過表達GOLPH3促進YB1的表達;4.與陰性對照組相比，應(yīng)用INK128抑制mTOR活性后，抑制腦膠質(zhì)瘤U251細胞的遷移和侵襲，且下調(diào)YB1的表達。而應(yīng)用Rapamycin抑制mTOR活性后，無明顯變化;5.與對照組相比，過表達GOLPH3可增加U251細胞遷移和侵襲能力，而應(yīng)用INK128