在心房成纖維細胞中AngⅡ經(jīng)PDGF-Rac1-NFκB途徑促進心房纖維化形成的機制.pdf

1、背景：
　　心房顫動（房顫）是臨床上常見的心律失常之一，其發(fā)病率隨年齡增長而增加。房顫與多種基礎(chǔ)心臟疾病相關(guān)如，冠狀動脈粥樣硬化心臟?。ü谛牟。?、高血壓、心臟瓣膜病、心力衰竭（心衰）以及心臟手術(shù)等，且尚有相當一部分房顫患者無可檢測到的心臟基礎(chǔ)疾病。房顫引發(fā)血流動力學障礙和血栓栓塞事件，致使其發(fā)病率高、死亡率高、經(jīng)濟花費巨大。目前，房顫的發(fā)病機制尚未完全明確，其臨床治療效果也不滿意。
　　房顫的藥物治療方法主要是針對誘發(fā)房顫的

2、基質(zhì)，心房纖維化是一個重要的房顫基質(zhì)，其與反復房顫事件后心房結(jié)構(gòu)進行性退化有關(guān)。心房纖維化的具體分子機制目前仍不清楚，目前研究發(fā)現(xiàn)，轉(zhuǎn)化生長因子β（TGF-β）、絲裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、Janus激酶(JAK)/信號轉(zhuǎn)導子和轉(zhuǎn)錄激活子(STAT）通路、結(jié)締組織生長因子（CTGF）、氧化的（Ca2+）/鈣調(diào)蛋白依賴蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）等參與心房纖維化的形成。腎素血管緊張素系統(tǒng)與多種心血管疾病的發(fā)病機制相關(guān)，心臟局部RAS系統(tǒng)

3、的激活作為一個始動因子在心房纖維化中發(fā)揮重要作用。RAS激活后，通過其主要活性成分AngⅡ刺激大量信號途徑激活，引起心房纖維化，目前已證實的致心臟結(jié)構(gòu)重構(gòu)的確切信號通路有，AngⅡ/Rac1/STAT3、AngⅡ/Rac1/CTGF/Cx43（N-Cadherin）、Ang/Cn/NFAT/MMPs、AngⅡ/MAPKs/TGF-beta1/TRAF6、肥大細胞/PDGF-A軸等。
　　本課題前期研究已發(fā)現(xiàn)，房顫病人和胸主動脈部分

4、結(jié)扎的大鼠模型的心房組織中，心房纖維化加重，AngⅡ的濃度升高，并且伴隨著PDGF、Rac1、NF-κB表達增加。而后在分別運用厄貝沙坦和/或辛伐他汀干預后發(fā)現(xiàn)，心房纖維化程度的降低，AngII濃度降低，并伴隨PDGF、活性Rac1及NF-κB的表達量減少。提示AngII、PDGF、Rac1及NF-κB均參與心房纖維化機制的形成，厄貝沙坦和辛伐他汀可有效抑制心房纖維化的形成。
　　目的：
　　從體外培養(yǎng)細胞水平上，進一步探討

5、AngII、PDGF、Rac1以及NF-κB是否有相互作用，以及其之間的上下游關(guān)系。
　　方法：
　　分離培養(yǎng)原代SD鼠心房成纖維細胞，用慢病毒載體轉(zhuǎn)染wild-typePDGF（WT-PDGF）,constitutivelyactivePDGF(PDGF-C)，dominant－negativePDGF(PDGF-D)，ConstitutivelyactiveRac1(RacV12)和dominant－negativeRa

6、c1(RacN17)，并用AngⅡ、辛伐他汀、厄貝沙坦、Rac1特異性阻滯劑NSC23766干預心房成纖維細胞，用免疫印跡測定NF-κB的蛋白表達量，PAK-PBDPulldown測定活性Rac1的表達，ELISA測定細胞內(nèi)的PDGF蛋白的含量，實時定量PCR測定纖維化標記物COL1A1mRNA水平表達，以及PDGF與Rac1的轉(zhuǎn)染率。
　　結(jié)果：
　　1.在心房成纖維細胞中，AngⅡ（10-6mol/L）不同時間刺激心房成

7、纖維細胞后，細胞內(nèi)PDGF的濃度在AngⅡ干預5min時增加（p＜0.05），活性Rac1的表達在30min時顯著升高（p＜0.01）、NF-κB蛋白表達量在2h時明顯增加（p＜0.01）。AngⅡ以不同濃度干預心房成纖維細胞后24h后,細胞內(nèi)PDGF的濃度在AngⅡ濃度為10-8mol/L時顯著升高（p＜0.01），活性Rac1的表達以及NF-κB蛋白表達量在AngⅡ濃度為10-7mol/L時均增加（p＜0.05）。
　　2.在

8、心房成纖維細胞內(nèi)，高表達PDGF后，活性Rac1與NF-κB蛋白表達量均升高（均p＜0.01）。沉默PDGF后，活性Rac1與NF-κB蛋白表達量均降低（均p＜0.01）。
　　3.在心房成纖維細胞內(nèi)，高表達Rac1后，NF-κB蛋白表達量升高（p＜0.01），沉默Rac1后，NF-κB蛋白表達量降低（p＜0.01）。
　　4.分別用辛伐他汀和厄貝沙坦干預心房成纖維細胞后，Rac1蛋白的活性與NF-κB蛋白的表達均降低（均p

9、＜0.01），且二者聯(lián)合干預時，降低的程度更大。
　　5.Rac1特異性抑制劑NSC23766干預心房成纖維細胞后，NF-κB蛋白的表達量降低（p＜0.01）。
　　結(jié)論：
　　本研究，從體外培養(yǎng)細胞水平，揭示AngⅡ通過PDGF/Rac1/NF-κB信號通路促進心房纖維化的形成，RAS抑制劑和他汀類藥物可阻斷這一信號通路，逆轉(zhuǎn)AngⅡ介導的心房纖維化。同時提示PDGF可能是促進心房纖維化的重要因子，并且是防治房顫的新