調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號對成纖維細(xì)胞活性的影響.pdf

1、目的:
　　探討在復(fù)合培養(yǎng)的條件下,通過調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號,了解其對成纖維細(xì)胞增殖能力、以及分泌細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞因子的影響。
　　方法:
　　在誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞終末分化的過程中,用Jagged-1或者γ-分泌酶抑制劑DAPT進(jìn)行預(yù)處理,調(diào)控角質(zhì)形成細(xì)胞中的Notch信號,然后通過血清刺刺激和提升至氣液交界面使其達(dá)到復(fù)層生長和終末分化,后與成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)。首先,在復(fù)合培養(yǎng)前,即誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞分化的過程

2、中,通過real-timePCR檢測Notch信號受體Notc-1、相應(yīng)配體Jagged-1、下游調(diào)控基因p21和p63的表達(dá),明確Notch信號是否活化。其次,通過將調(diào)節(jié)Notch信號后的角質(zhì)形成細(xì)胞與成纖維細(xì)胞復(fù)合培養(yǎng),細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測成纖維細(xì)胞增殖能力、real-timePCR和ELISA分別從mRNA和蛋白質(zhì)水平檢測成纖維細(xì)胞合成和分泌的Collagen-1、Fibronectin、KGF和細(xì)胞因子的表達(dá)。
　　結(jié)果:

3、　　用Fc段和DMSO分別對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,檢測其Notch信號下游分子p21和p63的表達(dá),與Blank組相比,均未見明顯異常(P>0.05)。而用Jagged-1對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,檢測p21和p63、以及Notch信號受體Notch-1和相應(yīng)配體Jagged-1在角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá),均發(fā)現(xiàn)Notch信號明顯活化。用DAPT對角質(zhì)形成細(xì)胞進(jìn)行預(yù)處理,結(jié)果表明:相對于Blank組,DAPT組角質(zhì)形成細(xì)胞中Notch信號

4、受到抑制。分別對復(fù)合培養(yǎng)后第1天、第3天和第5天的成纖維細(xì)胞進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)Notch信號活化的Jagged-1組的角質(zhì)形成細(xì)胞能夠明顯促進(jìn)與其共培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞的增殖、分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF、以及TGF-β1的合成(P<0.05)。而在Notch信號被抑制的DAPT組,成纖維細(xì)胞的增殖能力與Blank組對比雖無明顯差別(P>0.05),但其分泌Collagen-1、Fibronectin、KGF和TGF