ALA-紅光-PDT對成纖維細(xì)胞增殖活性及自噬的影響.pdf

1、目的:
　　 1.觀察ALA-紅光-PDT對體外培養(yǎng)人皮膚成纖維細(xì)胞形態(tài)及增殖活性的影響，探討在體外條件下模擬ALA-紅光-PDT嫩膚的合適處理參數(shù)。
　　 2.觀察ALA-紅光-PDT對成纖維細(xì)胞自噬的影響，初步探討ALA-紅光-PDT嫩膚可能的機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.5-氨基酮戊酸(ALA)孵育成纖維細(xì)胞后，予以不同時間的紅光照射成纖維細(xì)胞，光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　 2.

2、以不同濃度的ALA孵育成纖維細(xì)胞后以不同劑量照射成纖維細(xì)胞，四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測各組細(xì)胞增殖活性的變化。
　　 3.ALA-紅光-PDT處理成纖維細(xì)胞后，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法檢測自噬相關(guān)基因LC3及Beclinl mRNA的表達(dá)情況。
　　 4.ALA-紅光-PDT處理成纖維細(xì)胞后，MDC染色法檢測細(xì)胞內(nèi)自噬泡的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1.ALA+紅光10min組細(xì)胞照射后形態(tài)無明顯改變

3、;ALA+紅光20min和ALA+紅光30min組細(xì)胞照射后細(xì)胞出現(xiàn)變形，皺縮，死亡。
　　 2.紅光照射時間為20min時，ALA濃度為0.25mmol/l組細(xì)胞與對照組比較細(xì)胞活性無明顯變化(P＞0.05);ALA濃度為0.5mmol/l、1.0mmol/l及2.0mmol/l組細(xì)胞增殖活性明顯下降(P＜0.05)。ALA孵育濃度為1.0mmol/l時，紅光照射時間為5min及10min組細(xì)胞與對照組比較增殖活性無明顯變化(

4、P＞0.05);紅光照射時間為15min、20min、30min組細(xì)胞增殖活性明顯下降(P＜0.05)。
　　 3.ALA-紅光-PDT處理成纖維細(xì)胞后，隨著時間延長，LC3和Beclinl mRNA水平逐漸升高，24小時達(dá)到高峰，48小時出現(xiàn)回落(P＜0.05);與對照組比較，ALA+紅光組成纖維細(xì)胞LC3和Beclin1mRNA水平明顯升高(P＜0.05)。
　　 4.與對照組比，ALA+紅光組成纖維細(xì)胞內(nèi)自噬泡明顯