人RNase-Ⅲ Dicer在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中表達(dá)量的研究.pdf

1、本文研究了與RNA干擾(RNA interference，RNAi)相關(guān)的酶-人RNase-HI Dicer在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(primary hepatocellular carcinoma，PHC)中表達(dá)量的改變，并初步探討Dicer表達(dá)量的改變與乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)的持續(xù)復(fù)制及與PHC惡性增殖趨勢(shì)的關(guān)系。全文分為三個(gè)部分： 第一部分實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法的建立及Dicer mRNA

2、在PHC中的表達(dá)研究。 目的：了解PHC中Dicer mRNA表達(dá)量的變化。 方法：首先建立一個(gè)特異性強(qiáng)、靈敏度高、重復(fù)性好、定量準(zhǔn)確、速度快、全封閉的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法，對(duì)人正常肝細(xì)胞系WRL-68，肝癌細(xì)胞系HepG2、HepG2.2.15及20例PHC組織和癌旁配對(duì)肝組織進(jìn)行Dicer mRNA表達(dá)量的檢測(cè)。 結(jié)果：與人正常肝細(xì)胞系WRL-68相比，肝癌細(xì)胞系HepG2、HepG2.2.15中Di

3、cer mRNA的表達(dá)量顯著下降；與癌旁配對(duì)肝組織相比，PHC組織中Dicer mRNA的表達(dá)量也顯著下降。 結(jié)論：在PHC中，細(xì)胞水平和組織水平Dicer mRNA的表達(dá)量均明顯下降。 第二部分Dicer蛋白在PHC中的定位及表達(dá)研究。 目的：了解PHC中Dicer蛋白在細(xì)胞中的定位及其表達(dá)量的改變。 方法：用免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry，ICC)和免疫組織化學(xué)(immunohi

4、stochemistry，IHC)定位方法檢測(cè)Dicer蛋白在人正常肝細(xì)胞系WRL-68，肝癌細(xì)胞系HepG2、HepG2.2.15及20例PHC組織和癌旁配對(duì)肝組織中的定位。用半定量免疫印跡(western blotting，WB)方法檢測(cè)Dicer蛋白在人正常肝細(xì)胞系WRL-68、人胎肝細(xì)胞系L-02，肝癌細(xì)胞系HepG2、HepG2.2.15、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7及20例PHC組織和癌旁配對(duì)肝組織中的表達(dá)。

5、 結(jié)果：Dicer蛋白在PHC中主要定位于胞漿內(nèi)。與人正常肝細(xì)胞系WRL-68相比和與人胎肝細(xì)胞系L-02相比，肝癌細(xì)胞系HepG2、HepG2.2.15、Hep3B、SMMC-7721、Huh-7中Dicer蛋白的表達(dá)量都上升；與癌旁配對(duì)肝組織相比，PHC組織中Dicer蛋白的表達(dá)量也顯著上升。 結(jié)論：在PHC中Dicer蛋白是定位于胞漿內(nèi)的一種酶；細(xì)胞水平和組織水平Dicer蛋白的表達(dá)量均明顯上升，而Dicer mRN

6、A表達(dá)水平卻顯著下降，提示Dicer從轉(zhuǎn)錄水平到翻譯水平存在著某種調(diào)節(jié)放大機(jī)制。 第三部分RNAi對(duì)Dicer蛋白表達(dá)的影響及Dicer表達(dá)異常與HBV持續(xù)復(fù)制及與PHC惡性增殖趨勢(shì)關(guān)系的研究。 目的：了解Dicer蛋白表達(dá)量的改變是否與HBV的持續(xù)復(fù)制及是否與PHC的惡性增殖趨勢(shì)有關(guān)。 方法：選用HBV陽性肝癌細(xì)胞系HepG2.2.15作為實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞，采用RNAi技術(shù)干擾Dicer蛋白的表達(dá)，觀察與HBV持續(xù)復(fù)

7、制及與該細(xì)胞惡性增殖趨勢(shì)有關(guān)指標(biāo)的變化。 結(jié)果：Dicer在干擾48h后明顯下降，此時(shí)與HBV持續(xù)復(fù)制有關(guān)的指標(biāo)無顯著性差異；但該細(xì)胞達(dá)到一定的細(xì)胞抑制率，且與該細(xì)胞惡性增殖趨勢(shì)有關(guān)的指標(biāo)除白蛋白(albnmin，ALB)外，甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(aspartate aminotransferas