原發(fā)性肝細胞癌中ING1基因表達的研究.pdf

1、目的：構建ING1b表達質粒。檢測原發(fā)性肝細胞癌標本及配對的非腫瘤組織中ING1基因總體表達水平以及ING1基因主要轉錄本轉錄水平的變化，初探ING1基因不同轉錄本在肝細胞癌進展中的意義。 方法：1、將ING1b全長cDNA片段連接入pUB6A載體。2、瞬時轉染Hela細胞，于48小時后提取細胞總蛋白，用Western印跡證實其表達。以該蛋白樣品作為后續(xù)Western印跡實驗的陽性對照。3、用Western印跡方法檢測多個腫瘤細

2、胞系及有代表性的肝組織標本中ING1基因不同轉錄產物的表達譜。4、用免疫組織化學方法及半定量RT-PCR方法，分別檢測31對肝細胞癌標本及配對的非腫瘤組織中ING1基因總體表達水平以及ING1基因兩種主要轉錄本的轉錄水平。 結果： 1.成功構建了p33ING1b-V5融合蛋白表達質粒。 2.在HepG2、Bel7402、MCF7以及Hela細胞系總蛋白中，只檢測到了p33ING1b。 3.在肝細胞癌標本及

3、非腫瘤組織中ING1a、ING1b為該基因的主要轉錄本。 4.在低分化腫瘤病例組及TNMⅢA-ⅢB期病例組內，腫瘤組織中ING1基因總體表達水平高于配對的非腫瘤組織(p＜0.01)，腫瘤組織中ING1b轉錄水平明顯高于配對的非腫瘤組織(p＜0.01)。而在高分化腫瘤病例組及臨床分期較早的TNMⅠ-Ⅱ期病例組內，腫瘤組織與配對的非腫瘤組織間ING1基因總體表達水平以及ING1b轉錄水平無明顯差異(p＞0.05)。在腫瘤組織與配對的