ETV2表達(dá)與原發(fā)性肝細(xì)胞癌不良預(yù)后關(guān)系的研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一。盡管臨床診斷水平及外科技術(shù)不斷提高，但由于肝癌具有高的侵襲轉(zhuǎn)移能力，肝切除后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高，致使肝癌的整體治療水平并未取得顯著改善，肝癌病人的5年生存率至今仍無(wú)顯著提高。大量的資料顯示肝癌術(shù)后的主要死因是復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。因此，深入研究肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制，探索防治肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的手段，對(duì)進(jìn)一步提高肝癌整體治療水平具有重要意義。Ets變異體2

2、（ets variant2，ETV2）又稱ER71/Etsrp，是Ets家族PEA3亞家族成員之一。最早是在斑馬魚(yú)胚胎中被發(fā)現(xiàn)，后期研究發(fā)現(xiàn)ETV2廣泛表達(dá)于哺乳動(dòng)物胚胎中。在斑馬魚(yú)胚胎敲除ETV2導(dǎo)致胚胎無(wú)法形成有功能的血管。ETV2-/-小鼠卵黃囊無(wú)法形成血管結(jié)構(gòu)。ETV2-/-胚胎鼠因血管缺失無(wú)法生長(zhǎng)發(fā)育而死亡。鑒于血管生成是影響HCC復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的一個(gè)關(guān)鍵因素，提示ETV2可能在肝癌復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮了十分重要的作用。本課題旨在研究

3、ETV2在肝癌細(xì)胞系和肝癌組織樣本中的表達(dá)情況，分析ETV2與肝癌臨床病理特征的相關(guān)性，并結(jié)合病例隨訪資料探討ETV2表達(dá)與肝癌預(yù)后的關(guān)系。研究結(jié)果顯示：
　?、錏TV2 mRNA和蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌(HCC)組織和肝癌細(xì)胞系中均呈低表達(dá)。采用實(shí)時(shí)定量Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)了30例肝癌組織(HCC)及其相應(yīng)的鄰近非癌肝組織(Adjacent Non-tumorous LiverTissue，ANLT)中的ETV2 m

4、RNA表達(dá)水平。隨后，我們又采用半定量RT-PCR檢測(cè)了同一批組織標(biāo)本HCC和ANLT中的ETV2 mRNA表達(dá)水平。同時(shí)檢測(cè)了正常肝細(xì)胞系L02及四種肝癌細(xì)胞系HepG2、SMMC-7721、MHCC97-L、HCCLM3中ETV2 mRNA的表達(dá)水平。Real-time PCR結(jié)果顯示，與鄰近非癌肝組織(ANLT)比較，ETV2在肝癌組織(HCC)中呈顯著低表達(dá)（0.485±0.01，P＜0.05）。將正常肝細(xì)胞系LO2中ETV2

5、mRNA表達(dá)量設(shè)為1，結(jié)果顯示SMMC7721、HepG2、MHCC97-L和HCCLM3細(xì)胞系中ETV2 mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為0.03±0.01、0.065±0.02、0.06±0.016、0.01±0.007，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(任意一組肝癌細(xì)胞系和LO2之間P＜0.05)，表明ETV2在肝癌細(xì)胞系中呈顯著低表達(dá)。進(jìn)一步用Western-blot檢測(cè)同一批組織標(biāo)本HCC和ANLT中ETV2蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示，ETV2蛋白在肝

6、癌組織(HCC)中的表達(dá)水平顯著低于鄰近非癌肝組織(ANLT)(0.12±0.02 vs.0.96±0.13，P＜0.05)。用Western-blot檢測(cè)正常肝細(xì)胞系LO2和肝癌細(xì)胞系SMMC7721、HepG2、MHCC97-L及HCCLM3中ETV2蛋白表達(dá)水平，以正常肝細(xì)胞系LO2作對(duì)照。結(jié)果顯示在上述肝癌細(xì)胞系的蛋白表達(dá)水平分別為0.26±0.02、0.36±0.04、0.30±0.03、0.21±0.02，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

7、(任意一組肝癌細(xì)胞系和LO2之間P＜0.05)，表明肝癌細(xì)胞系中ETV2蛋白表達(dá)水平顯著低于正常肝細(xì)胞系。
　?、鍱TV2低表達(dá)與肝癌臨床病理特征及生存預(yù)后密切相關(guān)。為了研究ETV2表達(dá)水平與肝癌臨床病理特征及生存預(yù)后的關(guān)系，我們采用免疫組化法檢測(cè)99例肝癌組織標(biāo)本中ETV2的表達(dá)水平。根據(jù)免疫組化檢測(cè)結(jié)果，我們將99例肝癌患者分為ETV2高表達(dá)組（56例）與低表達(dá)組(43例)，分析ETV2表達(dá)水平與肝癌臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)聯(lián)。

8、結(jié)果顯示，ETV2表達(dá)水平與腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目(P=0.001)、有無(wú)包膜(P=0.001)、有無(wú)靜脈浸潤(rùn)(P=0.001)、巴塞羅那分期(P=0.008）及Edmondson-Steiner分級(jí)(P=0.001)密切相關(guān)。生存結(jié)果分析顯示，ETV2低表達(dá)組中位總體生存時(shí)間為18.0月，高表達(dá)組為48.0月;ETV2低表達(dá)組中位無(wú)瘤生存時(shí)間為15.1月，高表達(dá)組為40.0月。表明ETV2低表達(dá)組的總體生存時(shí)間和無(wú)瘤生存時(shí)間均顯著低于ETV2高

9、表達(dá)組(P＜0.001)。與此同時(shí)，為了分析不同肝癌類型對(duì)肝細(xì)胞癌生存率的影響，我們又作進(jìn)一步作分層研究。將99例肝癌分為SHCC（小肝癌）、SLHCC（孤立性大肝癌）和NHCC（結(jié)節(jié)性肝癌）三個(gè)亞組，分析比較三個(gè)亞組的總體生存時(shí)間和無(wú)瘤生存時(shí)間的差異。結(jié)果顯示，SLHCC、SHCC和NHCC組的中位總體生存時(shí)間分別為為42.0月，40.0月和12.0月; SLHCC、SHCC和NHCC組的中位無(wú)瘤生存時(shí)間分別為41.0月，39.0月和

10、10.0月，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示:SHCC組和SLHCC組總體生存時(shí)間和無(wú)瘤生存時(shí)間均顯著高于NHCC組(P=0.001);而SHCC組和SLHCC組的總體生存時(shí)間(P=0.633)和無(wú)瘤生存時(shí)間(P=0.423)則無(wú)明顯差異。繼之，我們采用Cox風(fēng)險(xiǎn)回歸模型對(duì)肝癌患者的臨床特征和ETV2表達(dá)水平進(jìn)行單因素分析和多因素分析。單因素分析顯示腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目(P=0.001)、有無(wú)包膜(P=0.001)、靜脈浸潤(rùn)(P=0.001)，巴塞羅那分期(P

11、=0.001)、Edmondson-Steiner分級(jí)(P=0.015)、ETV2表達(dá)水平(P=0.001)是影響肝癌患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素;進(jìn)一步多因素分析顯示腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目(P=0.026)、靜脈浸潤(rùn)(P=0.006)及ETV2表達(dá)水平(P=0.021)是影響肝癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。根據(jù)以上研究結(jié)果我們得出以下結(jié)論:ETV2在肝癌組織及肝癌細(xì)胞系中呈一致性的顯著低表達(dá)。ETV2的表達(dá)水平、腫瘤結(jié)節(jié)數(shù)目、有無(wú)靜脈浸潤(rùn)與肝癌的生存預(yù)后密切