SMOC2在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的預(yù)后預(yù)測作用及功能的初步研究.pdf

1、背景及目的：肝癌是全球范圍內(nèi)高發(fā)的一類惡性腫瘤，其中大約有90％的肝癌為原發(fā)性肝癌（HCC）。據(jù)全球癌癥調(diào)查資料顯示，肝癌發(fā)病率在所有腫瘤中排列第五，因肝癌而死亡的人數(shù)在所有惡性腫瘤中高居第三位。在中國,肝癌更是威脅我國公民生命健康的主要腫瘤之一。據(jù)中國2015年癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)顯示，肝癌已成為我國實體瘤中第四位高發(fā)病率和第三位死因的癌癥。目前研究發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌的分子發(fā)病機制包括多基因及表觀遺傳的改變、染色體畸變、基因突變等，但關(guān)于HCC具

2、體發(fā)病機制仍不明確。因此，探索與HCC發(fā)生發(fā)展相關(guān)的潛在基因并研究其在HCC發(fā)生進展過程中的作用，對于人們更好地了解HCC發(fā)生發(fā)展的分子機制具有重要意義。
　　模塊化鈣結(jié)合蛋白2（SMOC2）屬于SPARC蛋白家族成員之一。有研究表明，SMOC2參與調(diào)節(jié)多種細(xì)胞生物學(xué)功能，如細(xì)胞周期、細(xì)胞增殖、遷移等，但關(guān)于其在腫瘤中作用的相關(guān)研究仍較少。目前，有研究利用微陣列分析技術(shù)發(fā)現(xiàn)SMOC2在多種腫瘤中呈現(xiàn)低表達(dá)，包括卵巢癌、胰腺癌等，由

3、此可推斷SMOC2在多數(shù)腫瘤中可能為抑癌基因，但目前仍未見關(guān)于SMOC2在HCC中的表達(dá)、預(yù)防診治意義及作用的研究報道。
　　本研究欲通過檢測SMOC2在HCC中的表達(dá)情況，結(jié)合肝癌患者病歷及隨訪資料來探討SMOC2表達(dá)與HCC患者臨床病理參數(shù)及預(yù)后的關(guān)系，并進一步探究SMOC2對HCC發(fā)展過程中的細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，從而來明確SMOC2在HCC中的臨床診治、預(yù)防意義及生物學(xué)功能。
　　方法：
　　實驗方法：采用熒光

4、定量RT-PCR技術(shù)檢測SMOC2在肝癌組織中的轉(zhuǎn)錄水平，利用western blotting和免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測SMOC2蛋白在肝癌標(biāo)本和肝癌細(xì)胞中的表達(dá)，探討SMOC2與肝癌患者腫瘤相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系，并分析其表達(dá)情況與患者預(yù)后的關(guān)系。通過慢病毒轉(zhuǎn)染，構(gòu)建過表達(dá)SMOC2的HepG2和Bel-7402細(xì)胞穩(wěn)株，研究SMOC2過表達(dá)后對肝癌細(xì)胞的生長活力、運動能力等的影響。
　　統(tǒng)計方法：肝癌組織和癌旁對照組織中的SMOC2在轉(zhuǎn)錄

5、水平、蛋白水平上的差異性比較及相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)功能指標(biāo)的差異性比較使用符號秩和檢驗；卡方檢驗用于分析SMOC2表達(dá)水平與HCC患者臨床病理參數(shù)間關(guān)系；生存分析用于比較SMOC2高表達(dá)組與低表達(dá)組之間總體生存期及無病進展生存期的差異；單因素、多因素Cox比例風(fēng)險回歸分析用于研究SMOC2表達(dá)及臨床病理指標(biāo)對HCC患者總體生存期及無病進展生存期的影響。
　　結(jié)果：
　　1、肝癌標(biāo)本中SMOC2 mRNA轉(zhuǎn)錄水平（n=40，P＜0.

6、0001）和蛋白表達(dá)水平（n=40，P=0.0101）明顯低于癌旁對照組織；較正常肝細(xì)胞系L02，SMOC2在肝癌細(xì)胞系中（Bel-7402,HepG2,QGY-7701,SK-Hep1,SMMC-7721）的表達(dá)水平下調(diào)。
　　2、免疫組化結(jié)果顯示SMOC2免疫陽性染色主要處于胞漿中；卡方檢驗結(jié)果表明SMOC2表達(dá)水平的高低在腫瘤大小(χ2=9.156, P=0.002)、腫瘤數(shù)量(χ2=4.896, P=0.027)、TNM分

7、期(χ2=16.356, P＜0.001)及是否發(fā)生轉(zhuǎn)移(χ2=6.141，P=0.013)中的分布情況存在著差異；生存分析發(fā)現(xiàn)SMOC2高表達(dá)組的總生存期（OS，P＜0.001）和無病進展生存期（DFS，P=0.001）明顯長于低表達(dá)組；多因素 Cox回歸分析顯示SMOC2表達(dá)水平是影響患者預(yù)后的獨立因素。
　　3、亞組分析結(jié)果顯示在AFP≤25ng/ml或＞400ng/ml、腫瘤長徑＜5cm或≥5cm及TNM分期為Ⅰ-Ⅱ的HC

8、C患者中，SMOC2高表達(dá)組總生存率及無病進展生存率均比低表達(dá)組高（P＜0.05）。
　　4、體外實驗顯示：肝癌細(xì)胞的SMOC2表達(dá)水平上調(diào)后，細(xì)胞的增殖、克隆形成以及遷移侵襲能力受到抑制，并且會阻礙肝癌細(xì)胞周期進程，誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期。
　　5、小鼠成瘤實驗顯示皮下注射過表達(dá)SMOC2肝癌細(xì)胞的裸鼠腫瘤生長速度明顯低于對照組（P＜0.05），皮下注射過表達(dá)SMOC2肝癌細(xì)胞的裸鼠長出的腫瘤體積及重量也明顯小于對