miR-202在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及臨床意義初步研究.pdf

1、背景:肝細胞癌是一種常見的高惡性程度的消化系統(tǒng)腫瘤，死亡率居全球第三。肝癌早期診斷水平與其預后息息相關，但由于其早期發(fā)現(xiàn)困難，確診多屬腫瘤晚期，導致傳統(tǒng)放化療及手術治療效果不佳。目前肝癌診斷主要依靠血清AFP水平，但其敏感性及特異性不甚理想，因此尋找新的無創(chuàng)生物標記物尤為重要。大量研究發(fā)現(xiàn)miRNAs與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關，且具有很強的細胞、組織特異性，可作為潛在的診斷標志物。miRNA是一類小分子非編碼RNA，因其靶基因眾多、調(diào)控機

2、制復雜成為近來研究熱點。研究表明肝癌中存在許多信號通路的異常激活，例如Notch、Wnt及Hedgehog（Hh）通路等。其中Hh通路是一條在胚胎發(fā)育時期調(diào)節(jié)細胞生長與分化的高度保守的形態(tài)發(fā)生通路，其異常激活與肝癌的發(fā)生、發(fā)展緊密相關。Gli1(Glioma-associated Oncogene Homolog1，Gli1)基因是Hh通路的核轉錄因子，其激活直接導致Hh信號通路下游目的基因轉錄水平的改變。已有文獻報道m(xù)iRNA可以靶向

3、抑制Hh信號通路因子參與Hh信號通路的活化，兩者協(xié)同調(diào)控腫瘤的發(fā)生、發(fā)展進程。在眾多靶向調(diào)控Gli1基因的肝癌相關miRNAs中，miR-202在肝癌組織中的表達水平僅被報道一次，迄今尚無文獻報道m(xù)iR-202在肝癌血清中的表達水平及其與肝癌患者臨床病理特征之間的聯(lián)系，以及在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中與Hh通路之間的相互作用。本研究通過檢測miR-202在原發(fā)性肝癌中的表達水平，分析其在肝癌中的臨床意義及潛在診斷價值，進一步探討Hh通路在肝癌

4、中的的協(xié)同調(diào)控機制。
　　目的:檢測miR-202在肝癌細胞、FFPE組織及血清中的表達情況，分析miR-202表達量與肝癌臨床病理參數(shù)之間的聯(lián)系，評價miR-202作為特異性生物標志物對肝癌的潛在診斷價值，初步探討miR-202與Hedgehog通路在肝癌中的作用，為進一步深入了解肝癌發(fā)病的分子機制提供依據(jù)。
　　方法:采用Real-time RT-PCR方法，分別以LO2細胞株、正常肝臟FFPE組織及健康志愿者血清作為對

5、照，以U6為內(nèi)參，檢測miR-202在肝癌細胞株、FFPE組織及血清標本中的中的表達情況，分析其與肝癌臨床病理參數(shù)的關系，并利用SPSS21.0軟件繪制miR-202、AFP及兩者聯(lián)合對肝癌的診斷ROC曲線，評價miR-202對肝癌的潛在診斷價值;以正常肝臟FFPE組織作為對照，以GADPH基因作為內(nèi)參，檢測Gli1基因在肝癌中的表達水平，采用SPSS軟件分析其與miR-202表達水平之間的相關性，為進一步深入探討肝癌發(fā)生發(fā)展的分子機制

6、提供初步依據(jù)。其中3株肝癌細胞株和LO2細胞為重慶醫(yī)科大學臨床檢驗診斷學省部共建教育部重點實驗室惠贈，70例肝癌FFPE組織及血清標本來自四川醫(yī)科大學附屬醫(yī)院2013年07月-2014年09月診治的70例原發(fā)性肝癌患者。
　　結果:1.miR-202在肝癌細胞株中的表達較人正常肝細胞系LO2的表達均顯著降低(P＜0.05)，miR-202在肝癌癌細胞株HepG2的表達量最低（0.0394±0.0141），顯著低于LO2細胞株(P＜

7、0.05);肝癌FFPE組織及血清miR-202表達量均較正常對照顯著降低（P＜0.05）。2.肝癌FFPE中miR-202的低表達和肝癌患者的年齡、性別、腫瘤部位、腫瘤最大徑、臨床分期、局部淋巴結轉移、遠處轉移和AFP濃度等腫瘤臨床特征無關(P＞0.05);肝癌血清miR-202表達量僅與腫瘤數(shù)目有關(P＜0.05);miR-202在同一患者肝癌血清中的表達量（0.33±0.30）顯著低于肝癌組織標本中表達量（0.51±0.26）(P

8、＜0.05)。3.miR-202和AFP腫瘤標志物聯(lián)合檢測可獲得較高的敏感度(81.8％)和特異度(93.0％)，曲線下面積最大(0.942)，并獲得高于單一miR-202或者AFP的特異性、Youden指數(shù)、陽性似然比/陰性似然比。4.Gli1基因在肝癌組織中的表達水平（3.45±2.07）相較于正常肝臟組織（1.34±0.58）明顯升高，兩組之間差異存在統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，在肝癌FFPE組織中，miR-202表達水平與Gli

9、1基因表達水平存在一定相關性（r=0.583，P＜0.005）。
　　結論:1.miR-202在肝癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能發(fā)揮相應的生物學作用，其表達下調(diào)可能是肝癌發(fā)生的早期事件，且在肝癌中表達穩(wěn)定。2.miR-202聯(lián)合AFP對肝癌診斷價值優(yōu)于單一AFP，提示miR-202與AFP的聯(lián)合診斷價值大于單獨指標的診斷價值。3.Hh通路中的核轉錄因子Gli1在肝癌中可能發(fā)揮一定作用，Gli1基因與miR-202可能在肝癌中的表達水平存在