PTEN與VEGF在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及相互作用.pdf

1、第一部分PTEN與VEGF在原發(fā)性肝細胞癌中的表達及其意義 一PTEN在原發(fā)性肝細胞癌中表達及其意義 目的：檢測第10號染色體上缺失與張力蛋白同源的磷酸酯酶基因(PTEN)蛋白及mRNA在肝細胞癌和癌旁組織中的表達，并分析和探討PTEN表達情況與HCC發(fā)生、發(fā)展、侵襲性及轉移的關系和臨床意義。 方法：利用免疫組織化學鏈霉素親合素—生物素—過氧化物酶復合物(SP)法、半定量逆轉錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測6

2、0例肝細胞癌及癌旁組織中PTENmRNA及蛋白表達，并進一步比較分析PTENmRNA及蛋白表達在二者中的差異。 結論：PTEN蛋白及mRNA在肝細胞癌組織中的表達陽性強度明顯低于癌旁組織中，并與肝細胞癌組織分化程度和侵襲性呈負相關。因此我們推斷PTEN基因表達率的高低可能與肝細胞癌的發(fā)生及預后均有關，PTEN表達水平一定程度上能反映肝細胞癌組織分化和侵襲性強弱，PTEN表達缺失提示肝細胞癌患者預后較差。 二VEGF在原發(fā)

3、性肝細胞癌中的表達及其意義 目的：檢測血管內皮生長因子(VEGF)蛋白及mRNA在肝細胞癌和癌旁組織中的表達，并分析和探討VEGF表達情況與HCC發(fā)生、發(fā)展、侵襲性及轉移的關系和臨床意義。 方法：利用免疫組織化學鏈霉素親合素—生物素-過氧化物酶復合物(SP)法、半定量逆轉錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測60例肝細胞癌及癌旁組織中VEGFmRNA及蛋白表達，并進一步比較分析VEGFmRNA及蛋白表達在二者中差異。

4、 結論：1、VEGFmRNA及蛋白在肝細胞癌組織中陽性表達不僅明顯高于癌旁肝組織，而且隨癌組織侵襲性及患者臨床惡性進展程度增加而增強，這可能是由于HCC進展過程中，需要大量新生血管為其提供氧和營養(yǎng)物質，因而，腫瘤侵襲性強、臨床惡性程度高者，VEGF轉錄、翻譯表達均增加，VEGF表達水平一定程度上能反映肝細胞癌組織分化和侵襲性強弱，肝細胞癌組織分化程度、侵襲性與VEGF表達呈正相關。2、本研究觀察到，VEGF主要在HCC細胞表達，而血管

5、內皮細胞僅個別弱表達，從而推測，VEGF可以通過自分泌機制作用于自身腫瘤細胞，也可能以旁分泌途徑作用于血管內皮細胞，具體機制有待進一步實驗證實。 三PTEN、VEGF和MVD在原發(fā)性肝細胞癌中相關性及其與臨床病理特征的關系 目的：肝細胞癌是富含血管的實體瘤，血管生成在其發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉移中起著重要的作用。本課題的前期實驗提示觀察PTEN與VEGF表達與肝細胞癌的發(fā)生、發(fā)展和侵襲、轉移起一定的作用，其水平一定程度上能

6、反映肝細胞癌組織分化和侵襲性強弱，本實驗觀察PTEN與VEGF在肝細胞癌中表達的相關性和肝細胞癌血管形成的關系。 方法：采用免疫組織化學鏈霉素親合素—生物素—過氧化物酶復合物(SP)法、半定量逆轉錄—聚合酶鏈反應(RT-PCR)檢測60例HCC及癌旁組織中PTEN與VEGF蛋白及mRNA表達和微血管密度。 結論：1、PTEN和VEGF蛋白表達呈負相關性，從而表明VEGF異常激活可能與PTEN基因表達缺失有密切關系。在肝細

7、胞癌中PTEN可能具有負向調節(jié)VEGFmRNA及其蛋白表達作用，這在臨床上有一定意義，即可根據PTEN蛋白陽性表達情況估計HCC患者病程是否進展及有無肝內轉移，初步估計預后。 2、肝細胞癌組織中VEGF蛋白表達與MVD呈正相關而與PTEN蛋白表達呈負相關，MVD在腫瘤邊緣部分分布最多，而且肝癌組織高侵襲區(qū)域通常位于其前沿，即周邊區(qū)域，該區(qū)域癌細胞分泌VEGF等細胞因子較多，新生血管數目較豐富，更易腫瘤細胞脫離原發(fā)灶進入血管，發(fā)生

8、侵襲和轉移，提示VEGF對新生血管形成起重要作用，而高表達MVD肝癌組織較低MVD值者更易復發(fā)和轉移、預后更差。 第二部分PTEN質粒轉染肝癌細胞對VEGF的作用及意義 目的：研究PTEN質粒轉染肝癌細胞HepG2細胞后，腫瘤細胞的生物學特性的變化及腫瘤細胞內VEGF的表達. 方法：將攜有PTEN基因的真核表達載體轉染HepG2細胞，應用RT-PCR、ELISA法檢測轉染的肝癌細胞內PTEN、VEGF在mRNA水平

9、的表達；應用免疫組化技術、WestenBlot等技術檢測轉染后肝癌細胞中PTEN、VEGF的蛋白表達；并檢測轉染后的細胞活力和繪制細胞生長曲線，反應PTEN過表達對肝癌細胞生物學行為的影響。 結論：PTEN在肝癌細胞中的過表達能夠有效地抑制肝癌細胞的增殖，并下調VEGF的表達，從而減少由VEGF介導的腫瘤血管形成。 第三部分VEGF反義寡核苷酸轉染肝癌細胞后PTEN的變化及意義 目的：研究VEGF反義寡核苷酸轉染

10、肝癌細胞后，對腫瘤細胞增殖的影響和PTEN表達的變化。 方法：將人工合成VEGF反義寡核苷酸轉染肝癌細胞hepG2后，應用流式細胞技術檢測轉染效率以及肝癌細胞的凋亡，觀察肝癌細胞的生長增殖的變化；同時應用RT-PCR技術檢測肝癌細胞中VEGF和PTEN的表達，應用激光共聚焦顯微鏡觀察轉染前后HepG2細胞PTEN表達及其形態(tài)學的變化。 論：VEGF反義寡核苷酸轉染HepG2肝癌細胞后，能夠有效地抑制腫瘤細胞的增殖活性，使