EphA7在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其體外抑制研究.pdf

1、原發(fā)性肝細(xì)胞癌是世界范圍內(nèi)發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一,位居惡性腫瘤相關(guān)死亡因?yàn)榈牡谌?其中中國原發(fā)性肝細(xì)胞癌患者年死亡人數(shù)>20萬,約占世界的53％。近年來,隨著人們對肝癌的日益關(guān)注和重視及相關(guān)研究的逐漸深入,肝癌的發(fā)病因?yàn)榧案呶Ｒ蛩匾鸦久鞔_,其發(fā)生發(fā)展過程中所涉及的病理變化也逐漸清楚,對高危患者的篩查方法更是得到了不斷完善,但肝癌患者的術(shù)后生存時(shí)間并未得到明顯提高。造成這種結(jié)果的主要因?yàn)槭歉伟┗颊叩牟∏楸容^隱匿,確診時(shí)多為晚期,導(dǎo)致

2、只有少數(shù)人可以接受根治性手術(shù)切除,多數(shù)肝癌患者只能接受姑息性手術(shù),或依賴于化療、放療和其他如肝動脈栓塞化療、無水酒精注射、射頻消融、微波凝固等療法,但這些方法治療后易發(fā)生肝癌復(fù)發(fā)且遠(yuǎn)期療效不理想。因此,深入研究肝癌的轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)的機(jī)制并探索有效的治療措施仍是當(dāng)前腫瘤研究的重點(diǎn)。
　　 目前,關(guān)于肝癌新的治療理念是以外科治療為主同時(shí)聯(lián)合應(yīng)用多種方法的綜合治療。研究證實(shí),綜合治療較單一治療在治療效果上優(yōu)勢明顯。在這方面,基因治療可被視

3、為一個(gè)潛在的輔助治療措施,迄今為止,已經(jīng)完成的臨床實(shí)驗(yàn)均證實(shí),基因治療的副作用在大多數(shù)情況下處于可以接受的范圍內(nèi)。由于基因治療的作用機(jī)制與傳統(tǒng)的治療不同,因此將基因治療方法和傳統(tǒng)治療方案的合理組合可以達(dá)到協(xié)同治療效應(yīng)。此外,改良的傳統(tǒng)的治療方法如TACE和PEI可以將基因治療的載體送入肝癌內(nèi)部,從而增加有效劑量并盡可能減少非靶細(xì)胞的副作用。RNA干擾技術(shù)是研究功能基因組學(xué)最有前途的工具,目前被廣泛的應(yīng)用在基因研究和基因治療中。如今,人們

4、利用這種技術(shù)研究已知或可疑的因素在腫瘤形成中發(fā)揮的作用,來探索腫瘤形成過程中新的調(diào)節(jié)因子,從而為疾病的治療提供新的選擇。
　　 Eph(erythropoiet in producing hepatoma cell line)家族是酪氨酸蛋白激酶受體中的最大亞族,參與了胚胎發(fā)育、細(xì)胞生長、組織塑形、神經(jīng)系統(tǒng)信號傳遞等重要的生理過程。EphA7作為該家族的重要一員,定位于染色體6q16.1靠近斷裂點(diǎn)的位置,其基因同源性較高且在人體

5、內(nèi)分布廣泛。EphA7受體及其配體Ephrin結(jié)合后可形成雙向信號傳導(dǎo),參與脊椎動物胚胎的早期發(fā)育和軸突導(dǎo)向等許多重要的生理過程,其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、大腦連接處的形成、神經(jīng)嵴細(xì)胞導(dǎo)向以及運(yùn)動神經(jīng)軸突形成過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。以往對EphA7的研究多集中在生理方面,近幾年來,其在腫瘤中所起的作用也被人們?nèi)找骊P(guān)注。如在肺癌、結(jié)腸癌、胃癌、前列腺癌、多形性惡性膠質(zhì)瘤等多種人類惡性腫瘤中均發(fā)現(xiàn)EphA7的異常表達(dá)。此外,有證據(jù)顯示EphA7在

6、腫瘤血管的形成、腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著重要作用。但總的來說,對EphA7在腫瘤中的研究尚處于資料和認(rèn)識的探索、積累階段。目前,國內(nèi)外有關(guān)EphA7在肝癌中的研究報(bào)道很少,僅做了初步篩查,未能形成系統(tǒng)性研究,且基于較少數(shù)量的臨床標(biāo)本,有可能會影響結(jié)果的可靠性,仍需進(jìn)一步的研究加以證實(shí)。因此,對EphA7在人類原發(fā)性肝癌中表達(dá)的情況進(jìn)行檢測,并從基因水平探索其對肝癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響,對于了解EphA7在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作

7、用機(jī)制、指導(dǎo)臨床工作具有重要的意義。
　　 本研究對EphA7在人類原發(fā)性肝癌、癌旁肝組織及正常肝組織中的表達(dá)情況進(jìn)行檢測,并分析其與原發(fā)性肝細(xì)胞癌臨床病理學(xué)因素之間的關(guān)系,對兩者的相關(guān)性及臨床意義作初步探討。在此基礎(chǔ)上,構(gòu)建針對EphA7基因的siRNA真核表達(dá)載體并轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞SMMC-7721,觀察RNA干擾抑制EphA7的表達(dá)對肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長、增殖和侵襲等生物學(xué)行為的影響。然后將轉(zhuǎn)染后的肝癌細(xì)胞在裸鼠中建

8、立移植瘤模型,驗(yàn)證EphA7的下調(diào)對肝癌細(xì)胞在活體動物體內(nèi)生長等的影響,奠定利用該基因治療肝癌的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),為了解EphA7在肝癌發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制、靶向EphA7基因治療肝癌提供理論依據(jù)。本研究分為以下四個(gè)部分:
　　 第一部分EphA7基因和蛋白在肝癌中的表達(dá)及臨床意義
　　 目的
　　 觀察EphA7基因和蛋白在原發(fā)性肝細(xì)胞癌中的表達(dá),分析EphA7的表達(dá)與肝癌臨床病理特征的關(guān)系并探討其臨床意義。
　

9、　 方法：
　　 收集40例肝癌組織及其相應(yīng)的癌旁肝組織和10例正常肝臟組織標(biāo)本。40例肝癌患者中男23例,女17例。年齡41～58歲,平均年齡48.3歲。Ⅰ～Ⅱ級16例,Ⅲ～Ⅳ級的24例。Ⅰ～Ⅱ期26例,Ⅲ期14例。分別采用RT-PCR、實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫組織化學(xué)和Western blot方法檢測上述標(biāo)本中EphA7基因和蛋白的表達(dá)情況,并分析其于原發(fā)性肝癌臨床病理因素的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1.

10、40例肝癌組織及相應(yīng)的癌旁肝組織和10例正常肝臟組織中均有EphA7基因的表達(dá),其表達(dá)量分別為20.0711±32.0232、4.5184±9.4738和4.1764±4.7193(P=5.399,P<0.05)。統(tǒng)計(jì)分析顯示肝癌組織中Ephh7基因的表達(dá)量顯著高于癌旁肝組織(P=0.015)和正常肝組織(P=0.013),而在旁癌肝組織和正常肝組織中EphA7基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.998)。
　　 2.EphA7

11、 mRNA的表達(dá)與肝癌患者的年齡、腫瘤大小、臨床分期和甲胎蛋白水平等各項(xiàng)臨床病理指標(biāo)均無關(guān)(P>0.05),而與腫瘤的分化程度、門靜脈癌栓和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)。分化程度低的肝癌患者EphA7 mRNA的表達(dá)明顯高于分化程度高者(P=0.030),有門靜脈癌栓的患者EphA7 mRNA表達(dá)明顯高于無門靜脈癌栓者(P=0.017),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者EphA7 mRNA表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P=0.013)。
　　 3

12、.EphA7蛋白的陽性表達(dá)主要定位于肝細(xì)胞和肝癌細(xì)胞的胞漿,以及纖維間隔內(nèi)血管壁的內(nèi)皮細(xì)胞。其中肝癌細(xì)胞中EphA7蛋白的陽性表達(dá)較強(qiáng),染色較深。癌旁肝組織及正常肝臟組織雖也可見到EphA7蛋白的陽性表達(dá),但顏色普遍較淺。Western blot分析發(fā)現(xiàn)Ephh7蛋白在肝癌組織、癌旁肝組織和正常組織中的表達(dá)量分別為0.5752±0.2590、0.4019±0.2234和0.3169±0.1594(F=7.826,P<0.05)。肝癌組織

13、組織中EphA7蛋白的表達(dá)量顯著高于癌旁肝組織(P=0.001)和正常肝組織(P=0.003),而在癌旁肝組織和正常肝組織中的其表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.309)。
　　 4.肝癌組織中EphA7蛋白的表達(dá)與肝癌患者的年齡、腫瘤大小、臨床分期等臨床病理指標(biāo)均無關(guān)(P>0.05),而與腫瘤的分化程度、有門靜脈癌栓、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和AFP水平有關(guān)(P<0.05)。分化程度低的肝癌患者EphA7蛋白的表達(dá)明顯高于分化程度高者(P=0.

14、001),有門靜脈癌栓的患者EphA7蛋白的表達(dá)明顯高于無門靜脈癌栓者(P=0.008),有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者EphA7蛋白的表達(dá)明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P=0.033),AFP水平高者EphA7蛋白的表達(dá)顯著高于AFP水平低者(P=0.013)
　　 結(jié)論：
　　 EphA7不僅參與了正常肝臟細(xì)胞的生長發(fā)育過程,還與肝臟細(xì)胞的惡性轉(zhuǎn)化密切相關(guān)。其可能在肝癌的惡性轉(zhuǎn)化、侵襲和轉(zhuǎn)移等生物學(xué)行為中發(fā)揮重要作用。
　　 第二

15、部分pRNA-SiEphA7千擾表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
　　 目的
　　 成功構(gòu)建針對酪氨酸蛋白激酶受體EphA7基因的RNA干擾真核表達(dá)載體pRNA-siEphA7。
　　 方法：
　　 根據(jù)Genbank上人類EphA7基因的核苷酸序列及siRNA.的設(shè)計(jì)原則,選擇3段序列:638-656nt、713-73lnt和1456-1474nt作為干擾片段,所有寡核苷酸末端均加上與質(zhì)粒載體pRNA-U6.1/N

16、eo對應(yīng)的酶切識別位點(diǎn)及轉(zhuǎn)錄終止子,人工合成針對EphA7的發(fā)夾樣結(jié)構(gòu)siRNA互補(bǔ)雙鏈寡核苷酸。經(jīng)過退火、質(zhì)粒線性化以及體外重組等過程,構(gòu)建抑制EphA7基因表達(dá)的干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3。將干擾載體轉(zhuǎn)染入感受態(tài)大腸桿菌DH5α后進(jìn)行克隆和篩選,PCR鑒定及基因測序驗(yàn)證干擾載體的準(zhǔn)確性。
　　 結(jié)果：
　　 1.新合成的正義及反義寡核苷酸,經(jīng)退火處理形成雙鏈互補(bǔ)結(jié)構(gòu)。經(jīng)DNA片段純化及回收后,在1.

17、5％的瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳,在UVP凝膠成像分析儀上對照Marker進(jìn)行驗(yàn)證,可見100bp附近的清晰條帶,與設(shè)計(jì)的寡核苷酸大小118bp相吻合。
　　 2.以空載體pRNA-U6.1/Neo為對照,使用插入鑒定引物P1和P2進(jìn)行PCR擴(kuò)增篩選鑒定,得到310bp左右的擴(kuò)增片段的陽性克隆,證明已經(jīng)插入pRNA-U6.1/Neo載體。
　　 3.對3個(gè)重組質(zhì)粒進(jìn)行測序,結(jié)果證實(shí)插入的寡核苷酸序列正確,進(jìn)一步證實(shí)重組質(zhì)粒成功

18、構(gòu)建。
　　 結(jié)論：
　　 構(gòu)建了針對EphA7基因表達(dá)的干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3,經(jīng)克隆、篩選及鑒定,證實(shí)其插入的寡核苷酸序列正確,進(jìn)一步驗(yàn)證了其準(zhǔn)確性并證實(shí)干擾載體pRNA-siEphA7構(gòu)建成功。
　　 第三部分RNA干擾抑制EphA7基因表達(dá)對肝癌細(xì)胞株SMMC-7721生物學(xué)特性的影響
　　 目的
　　 觀察轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7對肝癌細(xì)胞SMMC-77

19、21的增殖活性、細(xì)胞周期以及體外侵襲能力等生物學(xué)行為的影響,篩選出抑制效果最強(qiáng)的干擾表達(dá)載體。
　　 方法：
　　 以轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞SMMC-7721作為對照,將構(gòu)建好的3組干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3轉(zhuǎn)染至肝癌細(xì)胞SMMC-7721,通過G418篩選的方法建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞SMMC-7721/siEphA7。利用Real-time PCR和Western blot技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染干擾載體前

20、后肝癌細(xì)胞SMMC-7721中EphA7基因和蛋白的變化,MTT法測定轉(zhuǎn)染干擾載體前后肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖活性的改變,流式細(xì)胞技術(shù)分析轉(zhuǎn)染干擾載體前后肝癌細(xì)胞SMMC-7721細(xì)胞周期的變化,Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測轉(zhuǎn)染干擾載體前后對肝癌細(xì)胞SMMC-7721體外侵襲能力的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過熒光倒置顯微鏡,可發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3、轉(zhuǎn)染空載體的肝癌細(xì)胞

21、SMMC-7721中均可見清晰的綠色熒光,證明其轉(zhuǎn)染成功。而未轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞SMMC-7721則不見熒光。
　　 2.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示,轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3、轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的的肝癌細(xì)胞SMMC-7721中EphA7基因的相對表達(dá)量分別為:0.1911±0.0153、0.1488±0.0199、0.0874±0.0123、0.4293±0.0533、0.4311±0.0410。經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析顯

22、示三組轉(zhuǎn)染干擾載體的肝癌細(xì)胞中EphA7基因的表達(dá)明顯低于空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在三組轉(zhuǎn)染干擾載體的肝癌細(xì)胞中,轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-3的肝癌細(xì)胞中EphA7基因的表達(dá)最低,與其他兩組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-1和2的兩組肝癌細(xì)胞中EphA7基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染載體的肝癌細(xì)胞中EphA7基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意

23、義(P>0.05)
　　 3.Western blot結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3、轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的的肝癌細(xì)胞SMMC-7721中EphA7蛋白的相對表達(dá)量分別為:O.2786±0.0392、O.3011±0.0372、0.2142±0.0147、0.5822±0.0291和0.5832±0.0154。三組轉(zhuǎn)染干擾載體的肝癌細(xì)胞中EphA7蛋白的表達(dá)低于空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

24、<0.05)。其中轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-3后對肝癌細(xì)胞中EphA7蛋白表達(dá)抑制最為明顯,顯著低于另外兩個(gè)干擾載體轉(zhuǎn)染組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-1和2的兩組肝癌細(xì)胞之間,以及轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞之間EphA7蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)
　　 4.經(jīng)MTT法檢測轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3、轉(zhuǎn)染空載體及未轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞SMMC-7721的體

25、外增殖能力并繪制生長曲線,發(fā)現(xiàn)第1天各組之間細(xì)胞增殖速度無明顯差異(P>0.05)。自第2天開始,轉(zhuǎn)染干擾載體的三組肝癌細(xì)胞增殖速度明顯低于空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組(P<0.05),但轉(zhuǎn)染干擾載體的三組肝癌細(xì)胞之間增殖速度無明顯差異(P>0.05)。自第3天開始,轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-3的肝癌細(xì)胞增殖速度開始低于轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1和2的肝癌細(xì)胞,并持續(xù)至第7天(P<0.05)。自第5天開始,轉(zhuǎn)染干擾載體pRN

26、A-siEphA7-1的肝癌細(xì)胞增殖速度開始低于轉(zhuǎn)染pRNA-siEphA7-2的肝癌細(xì)胞,并持續(xù)至第7天(P<0.05)。而空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組的肝癌細(xì)胞之間增殖速度始終沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 5.流式細(xì)胞檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3、轉(zhuǎn)染空載體和未轉(zhuǎn)染載體的肝癌細(xì)胞SMMC-7721在G1期、G2期和S期的細(xì)胞分布比例基本相近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　

27、 6.Transwell小室侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3的肝癌細(xì)胞SMMC-7721穿過人工基底膜的細(xì)胞分別是23.6±3.65、27±5.57和13.4±3.43。pRNA-siEphA7-3轉(zhuǎn)染組的肝癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞數(shù)明顯低于pRNA-siEphA7-1和2轉(zhuǎn)染組的穿膜細(xì)胞數(shù),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。而pRNA-siEphA7-1和2轉(zhuǎn)染組的肝癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞計(jì)數(shù)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)

28、。轉(zhuǎn)染干擾載體的三組肝癌細(xì)胞穿膜細(xì)胞計(jì)數(shù)明顯低于空載體轉(zhuǎn)染組(68.6±6.50)和未轉(zhuǎn)染組(72±9.30),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。空載體轉(zhuǎn)染組和未轉(zhuǎn)染組相比,其穿膜細(xì)胞計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-1、2和3后,肝癌細(xì)胞SMMC-7721中EphA7基因及蛋白的表達(dá)明顯受到抑制。EphA7的下調(diào)使肝癌細(xì)胞SMMC-7721的增殖活性明顯降

29、低、體外侵襲能力減弱,但細(xì)胞周期的變化不大。3組干擾載體中以pRNA-siEphA7-3(1456-1474nt)的干擾效果最好。
　　 第四部分RNA干擾抑制EphA7基因表達(dá)對裸鼠肝癌移植瘤生長的影響
　　 目的
　　 通過建立裸鼠肝癌移植瘤模型,在活體動物體內(nèi)觀察siRNA阻斷EphA7基因表達(dá)對肝癌細(xì)胞SMMC-7721生長的影響。
　　 方法：
　　 裸鼠荷瘤模型采用左上肢皮下注射肝癌細(xì)

30、胞的方法建立。將32只裸鼠隨機(jī)分為4組,每組8只,根據(jù)皮下注射細(xì)胞的不同分為以下幾組:SMMC-7721組(注射肝癌細(xì)胞SMMC-7721)；SMMC-7721/siEphA7組(注射轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-3的肝癌細(xì)胞SMMC-7721):SMMC-7721/Vector。組(注射轉(zhuǎn)染空載體的肝癌細(xì)胞SMMC-7721)；PBS組(不注射細(xì)胞,僅注入PBS做對照)。移植瘤模型成功建立后5周以頸椎脫臼法處死裸鼠,觀察并比較

31、各組肝癌移植瘤的大小及重量,應(yīng)用Real-time PCR、免疫組織化學(xué)技術(shù)以及Western blot檢測荷瘤組織中EphA7基因和蛋白的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：
　　 1.注射細(xì)胞約9～12天后,除PBS組外其余各組均可在注射部位的發(fā)現(xiàn)肝癌移植瘤的形成,證明肝癌細(xì)胞SMMC-7721、轉(zhuǎn)染干擾載體以及空載體的肝癌細(xì)胞SMMC-7721在裸鼠體內(nèi)均有成瘤活性,可成功建立裸鼠肝癌移植瘤模型。
　　 2.移植瘤模型

32、建立后第35天,S刪C-7721組、SMMC-7721/siEphA7-3組和SMMC-7721/Vector組的移植瘤體積分別為2.19±1.18cm3、0.84±0.32cm3和2.33±0.97cm。,重量分別為1.78±0.58g、0.79±0.14g和1.83±0.72g。SMMC-7721組和SMMC-7721/Vector組的移植瘤體積和重量明顯大于SMMC-7721/siEphA7-3組的移植瘤體積,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

33、<0.05),而SMMC-7721組和SMMC-7721/Vector組的移植瘤體積大小和重量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。轉(zhuǎn)染干擾載體pRNA-siEphA7-3對裸鼠肝癌移植瘤的的抑瘤率為55％。
　　 3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果顯示SMMC一7721/siEphA7-3組、SMMC-7721/Vector組和SMMC-7721組的裸鼠移植瘤組織中EphA7基因的表達(dá)分別是0.1911±0.0204、0.3900±0.0

34、863和0.4219±0.0595。SMMC-7721/siEphA7-3組中EphA7基因的表達(dá)明顯低于SMMC-7721組和SMMC-7721/Vector組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而SMMC-7721組和SMMC-7721/Vector組之間EphA7基因的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)
　　 4.免疫組化分析結(jié)果顯示SMMC-7721/siEphA7-3組EphA7蛋白陽性染色的細(xì)胞較少,染色較淺,呈淺

35、黃色。而SMMC-7721組和SMMC-7721/Vector組的EphA7蛋白陽性染色細(xì)胞較多,染色較深,呈棕黃色。Western blot分析顯示,SMMC-7721/siEphA7-3組、SMMC-7721/Vector組和SMMC-7721組的裸鼠移植瘤組織中EphA7蛋白的表達(dá)分別是0.2044±0.0153、0.4582±0.0631和0.4816±0.0607,SMMC-7721/siEphA7-3組中EphA7蛋白的表達(dá)