EphA2在大腸腺癌中的表達及其表達的體外抑制研究.pdf

1、大腸癌是我國較常見的消化道惡性腫瘤，近年來其發(fā)病率呈逐漸升高的趨勢。在西方國家大腸癌是最常見的惡性腫瘤之一，近50％的患者在明確診斷5年內(nèi)死亡，其死亡率居惡性腫瘤的第2位。大腸癌的發(fā)生、發(fā)展是多步驟、多基因參與的分子事件，包括多個癌基因的激活和抑癌基因的失活、基因組穩(wěn)定性調(diào)控系統(tǒng)的改變和DNA甲基化等眾多改變。并且這些基因改變也不遵循嚴格的先后順序，它們之間的聯(lián)系也不具有特異性，這種現(xiàn)象說明大腸癌的發(fā)生并不遵循單一的途徑。 受體

2、酪氨酸激酶家族多為轉(zhuǎn)化癌基因產(chǎn)物，研究者廣泛認為：該家族與常見人類腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。肝細胞生紅細胞生成素(EPH)Eph受體家族是受體酪氨酸激酶家族(RTKs)中已知最大家族，該受體家族是通過被稱之為ephrin(EFNs)的細胞表面配體的相互作用而被激活。 EphA2是Eph亞家族成員之一，與Eph家族其他成員相比，EphA2廣泛高表達于不同的腫瘤組織和細胞系，如：乳腺癌、惡性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，腎細胞癌等，目前認

3、為EphA2參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，是功能強大的癌基因。已經(jīng)證實EphA2的高表達能誘導(dǎo)非轉(zhuǎn)化乳腺和前列腺上皮細胞在體內(nèi)外的惡性轉(zhuǎn)化并促進其侵襲轉(zhuǎn)移。應(yīng)用EphA2蛋白的抗體靶向抑制試驗，下調(diào)EphA2蛋白表達的同時，也抑制了腫瘤細胞的生長，進而降低腫瘤的惡性程度，但其是否參與腫瘤細胞的細胞周期調(diào)節(jié)目前未見報道，因此該研究希望通過對大腸腺癌組織中細胞周期、細胞增值率、DNA倍體與EphA2關(guān)系的研究，明確EphA2與大腸腺癌癌細胞的細胞周

4、期和細胞增值率的關(guān)系。另有研究發(fā)現(xiàn)EphA2與其ephrin配體相結(jié)合，能抑制整合素調(diào)節(jié)細胞的粘附作用，從而降低細胞粘連，導(dǎo)致細胞具有高度的組織侵襲性。 本課題利用免疫組織化學(xué)方法(SP法)及逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)和流式細胞技術(shù)(FlowCytometer,FCM)，檢測EphA2在正常大腸粘膜組織和大腸腺癌組織中的表達及正常大腸粘膜組織和大腸腺癌組織中DNA倍體、細胞周期、細胞增值率，從蛋白水平及mRNA、D

5、NA水平觀察了EphA2的表達與臨床病理因素和DNA倍體、細胞周期、細胞增值率之間的關(guān)系，探討EphA2癌基因在大腸腺癌發(fā)生、發(fā)展和浸潤、轉(zhuǎn)移及預(yù)后中的作用及其與KAll腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因二者在大腸腺癌發(fā)生發(fā)展中的相互關(guān)系。同時應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制EphA2在結(jié)腸腺癌細胞系HCa8中的表達，以期了解EphA2在大腸腺癌中的作用機制及預(yù)后價值，并為大腸腺癌的基因治療提供理論依據(jù)。 本研究分為以下兩部分：