MiR-132抑制SIRT1調(diào)控SREBP-1c通路并誘導血管內(nèi)皮細胞炎癥反應的機制研究.pdf

1、背景:動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是臨床心腦血管疾病的病理基礎(chǔ),嚴重威脅著人類健康。有研究證實,在AS形成的各個階段中炎癥都參與并起關(guān)鍵作用。AS的發(fā)生與脂代謝及內(nèi)皮細胞炎癥直接相關(guān)。MicroRNA(miRNA, miR)可通過抑制SIRT1相關(guān)的炎癥反應有望用于治療AS,但是相關(guān)機制仍不清楚。
　　目的:探討MiR-132抑制SIRT1調(diào)控脂代謝過程,進而誘導血管內(nèi)皮細胞炎癥導致動脈粥樣硬化的機制。

2、r>　　方法:明確調(diào)控SIRT1的miRNAs,并進一步在臍靜脈內(nèi)皮細胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中下調(diào)其下游脂代謝相關(guān)調(diào)節(jié)基因 SREBP以及脂質(zhì)和膽固醇代謝途徑。
　　結(jié)果:在轉(zhuǎn)染了miR-132的臍靜脈內(nèi)皮細胞中,SIRT1的3’ UTR熒光素酶活性明顯減低(0.338±0.036)(P=0.000)。Western blot檢測SIRT1,SREBP-1c

3、及其下游的FASN、HMGCR蛋白表達水平明顯下調(diào)。qRT-PCR分析顯示轉(zhuǎn)染miR-132的臍靜脈內(nèi)皮細胞中,SIRT1(0.53±0.06)、及SREBP-1c(0.45±0.07)、FASN(0.55±0.09)、HMGCR(0.62±0.08)表達水平減低。在給予不同濃度TNF-α處理HUVECs中,sICAMI的水平隨TNF-α的濃度增高而增高,ICAMI及MMP9的蛋白水平也成劑量相關(guān)。經(jīng)轉(zhuǎn)染miR-132或其抑制劑48小時

4、,分別給予或不給予TNF-α處理4小時后,miR-132組較抑制劑組的炎癥因子水平明顯增強。給予miR-132抑制劑后,SIRT1、SREBP-1c及其下游調(diào)控基因FASN和HMGCR的基因表達及蛋白水平均有增高。對于內(nèi)皮細胞功能檢測中,轉(zhuǎn)染了miR-132的HUVECs,增殖、活性及遷移均有減低,而細胞凋亡則增加,尤其是TNF-α預處理組。
　　結(jié)論:SIRT1是miR-132的直接靶基因。MiR-132在臍靜脈內(nèi)皮細胞中通過抑