PKCβ-Egr-1介導ox-LDL誘導的血管內皮細胞炎癥應激機制的研究.pdf

1、目的：研究ox-LDL對內皮細胞炎癥分子ICAM-1表達的影響,探究PKCβ/MAPKs/Egr-1信號通路在其中的可能調控機制。
　　方法：以人臍靜脈內皮細胞株EA.hy926為研究對象，用不同劑量ox-LDL干預細胞6小時，蛋白印跡法檢測細胞內ICAM-1表達量，摸索ox-LDL干預的最佳劑量。用此濃度ox-LDL作為后續(xù)實驗干預劑量，分別干預細胞不同時間，蛋白印跡法檢測炎癥因子ICAM-1及信號分子PKCβⅡ、MAPKs磷酸

2、化及Egr-1蛋白表達情況，細胞免疫熒光法觀察細胞內PKCβⅡ磷酸化水平變化，real-time PCR方法檢測Egr-1mRNA表達情況。為探討PKCβⅡ對ox-LD L誘導內皮細胞ICAM-1表達的調控作用，用100nmol/L PKCβ抑制劑LY333531預孵育細胞1h后加入10μg/ml ox-LDL刺激細胞，在MAPKs、Egr-1及ICAM-1表達高峰時間點分別檢測其磷酸化水平或表達情況。
　　結果：ox-LDL誘導

3、內皮細胞ICAM-1表達存在濃度效應,10μg/ml ox-LDL對ICAM-1蛋白表達影響最顯著。10μg/ml ox-LDL誘導ICAM-1蛋白表達存在時間效應，細胞干預6h后對ICAM-1蛋白表達影響最明顯，為對照組2.1倍（p<0.05）。10μg/ml ox-LDL可上調PKCβⅡ磷酸化水平,在15min致其磷酸化水平達對照組3.6倍（p<0.05）、致ERK1/2磷酸化水平分別在15min和45min達對照組1.4和1.5倍

4、（p<0.05）、致JNK磷酸化水平在30min達其對照組1.2倍（p<0.05）。而在10μg/mlox-LDL的刺激下，Egr-1mRNA及蛋白水平均在45 min時達高峰，其分別為對照組1.5、2.5倍（p<0.05）。應用PKCβ抑制劑LY333531后ox-LDL誘導的PKCβⅡ磷酸化水平被抑制，LY333531減少了ox-LDL誘導的 ERK1/2/JNK磷酸化水平（25.1％和60%）、Egr-1 mRNA和蛋白表達（54