銀杏內(nèi)酯B抑制ox-LDL誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷的分子機(jī)制研究.pdf

1、本文通過(guò)文獻(xiàn)研究和實(shí)驗(yàn)研究?jī)刹糠謥?lái)探討銀杏內(nèi)酯B(GB)抑制氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞炎癥損傷的分子機(jī)制，對(duì)中醫(yī)藥防治動(dòng)脈粥樣硬化炎癥反應(yīng)的機(jī)理揭示有重要的臨床意義和理論價(jià)值。 文獻(xiàn)研究: 1．中藥銀杏葉文獻(xiàn)研究 銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物的干燥葉，用作藥物在我國(guó)已經(jīng)有五千年的歷史。首載于《本草品匯精要》，書(shū)中記載銀杏葉“歸肺經(jīng)，能斂肺平喘，益心止痛”。從對(duì)歷代文獻(xiàn)的整理以及查閱中概括銀杏

2、葉的性味歸經(jīng)、功效主治等，為本課題提供了理論依據(jù)。 2．中藥銀杏葉近代化學(xué)和藥理研究 中藥銀杏葉中含有多種化學(xué)成份，主要有24％的黃酮甙和6％特有的萜烯。黃酮類(lèi)化合物主要具有清除自由基、抗脂質(zhì)過(guò)氧化等作用。而萜類(lèi)化合物則為強(qiáng)效血小板活化因子(PAF)受體拮抗劑，具有抑制血小板聚集，抗血栓等作用。其中以銀杏內(nèi)酯B(以下簡(jiǎn)稱(chēng)GB)對(duì)PAF的拮抗性最強(qiáng)，具有廣泛的臨床應(yīng)用前景因而近幾年倍受關(guān)注。 3．有關(guān)動(dòng)脈粥樣硬化的

3、研究 從分子生物學(xué)角度闡明動(dòng)脈粥樣硬化始動(dòng)環(huán)節(jié)及其發(fā)生機(jī)理，明確其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的若干重要環(huán)節(jié)，進(jìn)而有針對(duì)性地選取實(shí)驗(yàn)指標(biāo)。 4．中醫(yī)藥對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化的研究 從中醫(yī)辯證論治的角度歸納動(dòng)脈硬化的癥型、病機(jī)、治則，并對(duì)近幾年用于治療動(dòng)脈粥樣硬化的藥物進(jìn)行簡(jiǎn)單綜述。 實(shí)驗(yàn)研究: 1.GB抗氧化損傷作用 方法：用DCFH-DA熒光標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測(cè)HUVEC內(nèi)活性氧(ROS)的含量；用W

4、estern blot方法檢測(cè)ox-LDL誘導(dǎo)HUVEC上游p38MAPK磷酸化的水平；用硫代巴比妥法(TBARS)檢測(cè)LDL的氧化程度。 結(jié)果：GB小劑量(25μg/ml)顯著抑制LDL氧化，MDA氧化程度與未氧化組比較基本相同，但大劑量GB(200μg/ml)抑制作用不顯著?；钚匝鯗y(cè)定表明300μg/ml ox-LDL刺激細(xì)胞明顯增加了細(xì)胞內(nèi)ROS含量，GB劑量依賴(lài)性地抑制OX-LDL誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)生。300μg/ml OX

5、-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞使p38MAPK磷酸化水平增加，300μg/ml GB有效抑制了ox-LDL誘導(dǎo)的p38MAPK磷酸化。 2.GB抑制炎癥蛋白表達(dá) 方法：免疫熒光染色觀察NF-kB的活化。用Western blot方法檢測(cè)ox-LDL誘導(dǎo)ICAM-1和COX-2的表達(dá)以及IkB磷酸化的水平。 結(jié)果：熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞經(jīng)ox-LDL(1mg/ml)刺激后，NF-kB活化進(jìn)入到核內(nèi)，GB(500μg/ml)有效