ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞HSP22的表達(dá)及他汀干預(yù)效果.pdf

1、目的:
　　探討高脂環(huán)境中熱休克蛋白22(Heat shock protein22，HSP22)在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)的表達(dá)及他汀的干預(yù)作用。
　　方法:
　　1.構(gòu)建HUVECs的高脂環(huán)境以模擬高脂損傷，并予他汀干預(yù):選擇不同藥物濃度和時間條件的氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)和阿托伐他汀(Atorvastatin)進(jìn)行干預(yù)，其中ox-LDL濃度為80μ g/ml，160μg/ml分別干預(yù)24 h，48

2、h，72 h，Atorvastatin濃度為40μ g/ml，80μg/ml分別干預(yù)24 h，48 h，72h，摸索其最佳干預(yù)濃度和時間。
　　2.實(shí)驗(yàn)分組:對照組、ox-LDL組、他汀組、ox-LDL組+他汀組（先予ox-LDL，后加他汀干預(yù)）。
　　3.觀察高脂損傷中HSP22表達(dá)水平的變化規(guī)律，使用PI單染色法檢測細(xì)胞凋亡、MTT檢測細(xì)胞增殖、Western blot檢測HSP22、eNOS、ELISA檢測TNF-a表

3、達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1、ox-LDL及Atrovastatin干預(yù)濃度及時間的篩選:
　　(1)不同ox-LDL干預(yù)濃度及時間對細(xì)胞增殖的影響:80μg/ml，160μg/ml時干預(yù)24 h，48h，72 h對細(xì)胞具有抑制作用(p＜0.05)。
　　(2)不同ox-LDL干預(yù)濃度及時間對HSP22蛋白表達(dá)影響:160μg/ml，作用48 h后，HSP22蛋白表達(dá)水平最高。
　　(3)不同Atorvasta

4、tin干預(yù)濃度及時間對細(xì)胞增殖的影響:40μg/ml，80μg/ml時干預(yù)24 h，48 h，72h對細(xì)胞具有促增長作用(p＜0.05)。
　　(4)不同Atorvastatin干預(yù)濃度及時間對HSP22蛋白表達(dá)影響:80μ g/ml阿托伐他汀處理48h時，HSP22蛋白表達(dá)水平最低。
　　2、根據(jù)篩選結(jié)果，選擇以下條件進(jìn)行實(shí)驗(yàn)干預(yù):A、對照組;B、ox-LDL組(160μg/ml、48h);C、他汀組（80μg/ml、48

5、h）;D、ox-LDL組+他汀組（先ox-LDL160μg/ml、24h;后加他汀80μg/ml、24h)。
　　(1) HSP22表達(dá):與對照組比較，ox-LDL組HSP22蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，他汀組HSP22蛋白表達(dá)降低(P＜0.05)。
　　(2) eNOS表達(dá):與對照組相比，ox-LDL組eNOS蛋白表達(dá)升高(P＜0.05)，他汀組eNOS蛋白表達(dá)降低(P＜0.05)。
　　(3)細(xì)胞增殖和凋亡:與對

6、照組相比，ox-LDL組使細(xì)胞增殖降低并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡增高(P＜0.05)，他汀組細(xì)胞增殖明顯增高(P＜0.05)。
　　(4) TNF-α表達(dá):與對照組相比，ox-LDL組TNF-α表達(dá)升高(P＜0.05)，他汀組TNF-α表達(dá)無明顯差異（P＞0.05），ox-LDL組+他汀組TNF-α表達(dá)升高P＜0.05;與ox-LDL組相比，他汀組和ox-LDL組+他汀組TNF-α表達(dá)降低P＜0.05。
　　結(jié)論:
　　使用ox-