阿托伐他汀在ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)中的作用研究.pdf

1、心、腦血管疾病是目前人類死亡的主要原因之一，動脈粥樣硬化是冠狀動脈、腦動脈等重要血管疾病的病理基礎(chǔ)。隨著其發(fā)病率及死亡率不斷上升，動脈粥樣硬化正成為心血管疾病中的熱點問題而引起人們的廣泛關(guān)注。對于本病的發(fā)病機制，最早提出的是脂肪浸潤學(xué)說，其后又提出血小板聚集和血栓形成學(xué)說，后來又提出了動脈粥樣硬化的損傷反應(yīng)學(xué)說，認為本病的各種危險因素最終都會損傷動脈內(nèi)膜，動脈粥樣硬化斑塊的形成是動脈內(nèi)膜對損傷作出反應(yīng)的結(jié)果。隨著研究的不斷深入，ROSS

2、教授在該學(xué)說的基礎(chǔ)上，又提出“動脈粥樣硬化是一種炎癥性疾病”的炎癥學(xué)說。
　　ROSS認為動脈粥樣硬化是動脈壁的一種炎癥性疾病，它的形成是血管內(nèi)皮細胞、單核細胞、血管平滑肌細胞與炎癥介質(zhì)相互作用的結(jié)果，以粥樣斑塊內(nèi)出現(xiàn)單核細胞、巨噬細胞和T淋巴細胞為特征。炎癥反應(yīng)貫穿于整個動脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中，乃至可以進一步引起心血管事件的發(fā)生。在動脈粥樣硬化的起始階段，許多因素可以引起動脈壁的炎癥反應(yīng)，其中ox-LDL是一個重要的促炎

3、物質(zhì)，它可以引起許多炎性相關(guān)基因的表達。這些基因表達的產(chǎn)物如粘附分子、趨化因子等可以促使局部單核細胞聚集、活化，并通過相應(yīng)的配體與動脈粥樣硬化斑塊處的血管內(nèi)皮細胞粘附，遷移到內(nèi)皮下，激活并分泌一些細胞因子進一步促進動脈粥樣硬化的發(fā)展。
　　他汀類(Statins)藥物屬于3-羥-3-甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶抑制劑，可以降低血液膽固醇的水平，是治療高脂血癥和動脈粥樣硬化的藥物中最有效的一類。越來越多的證據(jù)顯示，他汀類藥物能夠降低心

4、腦血管疾病的發(fā)病率和死亡率不僅僅依靠其降脂作用，除此之外還有多種其它的藥理作用，例如改善血管內(nèi)皮、促進纖溶、抗血栓形成等。近年來，關(guān)于他汀類藥物抗炎作用的研究也日漸增多，其抗炎作用的發(fā)現(xiàn)表明，應(yīng)用他汀類藥物治療動脈粥樣硬化除依靠其降脂作用外還有其他的益處，但是目前它具體的抗炎機制尚不明確。在本研究中，我們用ox-LDL作用于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)和單核細胞(THP1)，誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞和單核細胞的炎癥反應(yīng)，觀察阿托伐他汀能否降低ox

5、-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)以及闡明其影響炎癥反應(yīng)的機制。
　　第一章阿托伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC細胞炎癥反應(yīng)的影響
　　目的:觀察ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細胞表達ICAM-1、VCAM-1和MCP-1的效應(yīng)，同時用阿托伐他汀進行干預(yù)，觀察阿托伐他汀能否降低ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥分子的表達。
　　方法:
　　1.HUVEC細胞的培養(yǎng):復(fù)蘇HUVEC細胞，使用ECM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)，每天觀察細胞的形態(tài)及增殖活性。<

6、br>　　2.MTT法檢測ox-LDL對HUVEC細胞的增殖活性的影響。
　　3.實驗分組:(1)對照組，培養(yǎng)液培養(yǎng)，作為對照;(2)ox-LDL刺激組(濃度為100μg/ml)，只添加ox-LDL;(3)阿托伐他汀組（1州），只添加阿托伐他汀(4)阿托伐他汀(1μM)+ox-LDL(100μg/ml)組。
　　4.Western-Blot檢測ICAM1和VCAM1蛋白的表達變化。
　　5.Real-TimePCR檢測

7、ICAM1、VCAM1和MCP-1的mRNA表達變化。
　　6.ELISA檢測HUVEC細胞分泌的MCP-1的變化
　　結(jié)果:
　　1.MTT結(jié)果表明0.5、1、2.5、5μM的ox-LDL均未對HUVEC細胞的生長增殖產(chǎn)生明顯影響。
　　2.Western-Blot檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，ox-LDL可以增強ICAM1和VCAM1蛋白的表達，阿托伐他汀可以降低ox-LDL誘導(dǎo)的ICAM1和VCAM1蛋白的表達。

8、
　　3.Real-TimePCR檢測發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可以升高ICAM1、VCAM1和MCP-1mRNA的表達，阿托伐他汀可以降低ox-LDL誘導(dǎo)的ICAM1、VCAM1和MCP-1mRNA的表達。
　　4.ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可以增加HUVEC細胞分泌MCP-1，阿托伐他汀可以降低ox-LDL誘導(dǎo)MCP-1的分泌。
　　結(jié)論:
　　ox-LDL可以誘導(dǎo)臍靜脈內(nèi)皮細胞產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，阿托伐他汀可以降低

9、ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)。
　　第二章阿托伐他汀對ox-LDL誘導(dǎo)的THP1細胞炎癥反應(yīng)的影響
　　目的:觀察ox-LDL誘導(dǎo)單核細胞THP1分泌TNF-α、IL-6和IL-1β的效應(yīng)，同時用阿托伐他汀進行干預(yù)，觀察阿托伐他汀能否降低ox-LDL誘導(dǎo)的炎癥分子的表達。
　　方法:
　　1.THP1細胞的培養(yǎng):復(fù)蘇THP1細胞，使用RPMI-1640培養(yǎng)基體外培養(yǎng)，每天觀察細胞的形態(tài)及增殖活性。
　　2.M

10、TT法檢測ox-LDL對THP1細胞的增殖活性的影響。
　　3.實驗分組:(1)對照組，培養(yǎng)液培養(yǎng)，作為對照;(2)ox-LDL刺激組(濃度為100μg/ml)，只添加ox-LDL;(3)阿托伐他汀組（1μM），只添加阿托伐他汀(4)阿托伐他汀(1M)+ox-LDL(100μg/ml)組。
　　4.Real-TimePCR檢測TNF-α、IL-6和IL-1β的mRNA表達變化。
　　5.ELISA檢測THP1細胞分泌的

11、TNF-α、IL-6和IL-1β的變化
　　結(jié)果:
　　1.MTT結(jié)果表明0.5、1、2.5、5州的ox-LDL均未對THP1細胞的生長增殖產(chǎn)生明顯影響。
　　2.Real-TimePCR檢測發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可以升高TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達，阿托伐他汀可以降低ox-LDL誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達。
　　3.ELISA檢測發(fā)現(xiàn)，ox-LDL可以增加HUVEC細胞分