瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導的人單核巨噬細胞組織因子表達的影響及其機制.pdf

1、研究背景和目的：冠狀動脈內粥樣硬化斑塊由于血壓升高血流沖擊或者動脈內膜痙攣等原因由穩(wěn)定狀態(tài)轉變?yōu)椴环€(wěn)定狀態(tài)，而后發(fā)生斑塊內出血、破裂、血栓形成，是急性冠脈綜合征發(fā)生急性冠脈事件最主要的發(fā)病機理[1]。目前關于冠狀動脈粥樣硬化斑塊內血栓形成的形成機理已逐漸發(fā)展，已從過去普遍贊成的脂質沉積假說逐漸發(fā)展演變成包括內皮功能障礙、炎癥發(fā)應、細胞凋亡、組織因子等多種病理因素共同參與的病因理論[2]。動脈粥樣硬化斑塊轉變?yōu)椴环€(wěn)定斑塊發(fā)生斑塊內出血、壞

2、死、破漬后，潰瘍粗糙的表面易形成血栓，形成的血栓又使血管管腔的狹窄進一步加重甚至使管腔發(fā)生閉塞。巨噬細胞的浸潤、血小板活性增強、凝血和纖溶系統(tǒng)失衡、炎癥反應T細胞的堆積等都是觸發(fā)斑塊發(fā)生出血、破裂和血栓形成的病理性因素。正常生理狀態(tài)下，與血液接觸的細胞并不表達分泌組織因子(TF)，一但處在高血壓、炎癥、高血脂等病理因素的刺激下，血管內皮細胞和單核細胞、巨噬細胞的TF表達分泌加強[3]，增加動脈內壁血栓的形成的幾率及提高動脈粥樣硬化斑塊轉

3、變成不穩(wěn)定狀態(tài)危險。過去的科研認為引起冠脈梗塞的主要原因是冠狀動脈斑塊中血管內皮平滑肌細胞的持續(xù)增殖引起的管腔進行性狹窄，但目前的證據(jù)表明是冠脈斑塊的激活而不是狹窄參與了缺血和梗塞的發(fā)生…，大多數(shù)有急性冠脈綜合征的患者是由于斑塊激活為不穩(wěn)定斑塊，在表面形成血栓從而導致冠脈的狹窄或者閉塞。TF在單核及血管內皮細胞病理情況下才表達，能啟動外源性凝血途徑。粥樣斑塊破裂導致動脈粥樣硬化組織(AS)中的巨噬細胞表達分泌的TF直接暴露于血液，激活外

4、源性凝血途徑啟動凝血瀑布反應導致血管內血栓的形成。肝細胞合成膽固醇的過程中的限速酶是羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶，其能催化HMG-CoA合成甲基二羥戊酸(MVA)，而內源性的膽固醇合成中極其關鍵步驟是MVA的合成，因此，顯著減少內源性的膽固醇合成的一個途徑便是抑制HMG-CoA還原酶的活性。作為羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶抑制劑的瑞舒伐他汀(Rosuvastatin)，可明顯下調低密度脂蛋白、甘油三酯、升高高密度脂蛋白

5、，其能否通過LOX-1介導的ox-LDL途徑，減少TF的表達，從而減少急性冠脈事件的發(fā)生率，該方面的研究報道極少。本實驗以健康人外周靜脈血單核-巨噬細胞為實驗對象，研究瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導后的單核一巨噬細胞TF表達的影響并探討其可能的機制。
　　 目的：探討瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導的人單核一巨噬細胞組織因子(TF)表達的影響及其可能機制。
　　 研究方法：采用體外密度離心法分離健康人單核細胞培養(yǎng)并傳至4代后，

6、以佛波脂(160nmol/ml)誘導為巨噬細胞，培養(yǎng)24h后用于實驗。根據(jù)實驗要求分為空白對照組、ox-LDL組、LOX-I受體阻斷劑多聚肌苷酸組(PolyⅠ)、瑞舒伐他汀組。RT-PCR測各組LOX-1mRNA，TFmRNA的表達情況，ELISA檢測各組TF蛋白的表達。
　　 研究結果：用10×40倍倒置顯微鏡觀察，分離的人單核細胞經培養(yǎng)及佛波酯誘導后，細胞轉化為梭形，容易聚集貼壁，經流式細胞儀技術進行細胞鑒定，結果示大部分單

7、核細胞已經轉化為巨噬細胞，符合實驗要求。
　　 瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導后人單核一巨噬細胞LOX-1mRNA和TFmRNA表達影響
　　 ①對TFmRNA的影響：四組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=59.663P＜0.01)；Ox-LDL組與空白對照組比較，TFmRNA的表達顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)；多聚肌苷酸組與ox-LDL組比較，TFmRNA的表達下降(P<0.01)，多于空白對照組(P<0.0

8、1)，差異有統(tǒng)計學意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，TFmRNA的表達下降(P<0.01)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 ②對LOX-ImRNA的影響：四組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=170.513P

9、，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，LOX-1mRNA的表達下降(P=0.010)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導后人單核-巨噬細胞TF蛋白表達的影響四組之間比較，差異有統(tǒng)計學意義(F=259.098P<0.01)；Ox-LDL組與空白對照組比較，TF的表達顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；多聚肌苷酸組與ox-LD

10、L組比較，TF的表達下降(P=0.027)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義；瑞舒伐他汀組與ox-LDL組比較，TF的表達下降(P=0.008)，多于空白對照組(P<0.01)，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 LOX-1mRNA和TFmRNA及TF表達之間的相關性分析采用Pearson檢驗得LOX-1mRNA與TFmRNA之間相關系數(shù)r=0.882P<0.01；LOX-ImRNA與TF之間相關系數(shù)r=0.934p<0.

11、01；TFmRNA與TF之間相關系數(shù)r=0.863p<0.01。LOX-ImRNA、TFmRNA、TF間為正相關性。
　　 研究結論：
　　 (1)ox-LDL可誘導人單核．巨噬細胞LOX-1mRNA、TFmRNA、TF蛋白的表達增加。
　　 (2)LOX-1可能介導了ox-LDL誘導的人單核，巨噬細胞TF表達的增加，激活外源性凝血途徑，導致急性冠脈綜合癥(ACS)的發(fā)生。
　　 (3)瑞舒伐他汀可通過下