膽固醇流出對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究膽固醇流出對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響。 方法：用50mg/Lox-LDL與RAW264.7細(xì)胞共同孵育0，12，24，48，96小時(shí)。用50mg/Lox-LDL處理RAW264.7細(xì)胞48小時(shí)后加入不同濃度的HDL3(50，100，200mg/L)和膽固醇流出抑制劑Brefeldin(BFA)或膽固醇流出促進(jìn)劑β-cyclodextrin(β-CD)孵育24小時(shí)。油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂滴的形成情況；高效液相

2、分析法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇含量；液體閃爍計(jì)數(shù)器檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出；Hoechst33258觀察細(xì)胞凋亡形態(tài)；流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：用50mg/Lox-LDL與RAW264.7細(xì)胞共同孵育0，12，24，48，96小時(shí)，結(jié)果顯示：RAW264.7細(xì)胞的凋亡率隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)而顯著提高。在50mg/Lox-LDL與RAW264.7細(xì)胞共同孵育48小時(shí)出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)學(xué)改變(胞質(zhì)體積縮小，胞核凝集、邊緣化)，油紅O染色顯示

3、，細(xì)胞內(nèi)的大量脂滴形成，細(xì)胞膽固醇酯含量顯著增加，細(xì)胞呈典型泡沫化形態(tài)。用50mg/Lox-LDL處理RAW264.7細(xì)胞48小時(shí)后，加入不同濃度的HDL3(50，100，200mg/L)和膽固醇流出抑制劑BFA(4μmol)或β-CD(10mmol/L)孵育24小時(shí)。 結(jié)果顯示：HDL3呈濃度依賴性的促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)膽固醇流出和降低細(xì)胞內(nèi)的膽固醇含量，油紅O染色顯示，細(xì)胞內(nèi)的脂滴明顯減少。細(xì)胞的凋亡率也隨著HDL3濃度的升高而逐漸降低，細(xì)胞