硫化氫對巨噬細胞內吞ox-LDL的作用及相關機制研究.pdf

1、背景與目的：
　　 泡沫細胞的形成是動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)發(fā)病的起始和關鍵環(huán)節(jié)，而氧化型低密度脂蛋白(oxidizedlow-densitylipoprotein,ox-LDL)在此過程中起著核心作用。Ox-LDL通過巨噬細胞表面受體被細胞攝取，引起細胞內脂質聚積，同時由于ox-LDL本身的細胞毒性作用，進一步誘導巨噬細胞凋亡成為泡沫細胞。硫化氫(hydrogensulfide,H2S)是繼NO和C

2、O后的第三個氣體信號分子，已有研究表明其可通過多種途徑抑制AS的形成，但其機制尚未完全闡明。本實驗通過外源性硫化氫供體硫氫化鈉(sodiumhydrosulfide，NaHS)作用于體外培養(yǎng)的巨噬細胞Raw264.7，初步探討H2S對Raw264.7巨噬細胞內吞ox-LDL過程的影響并探討其相關機制。
　　 材料與方法：
　　 1．體外培養(yǎng)巨噬細胞Raw264.7，分別使用NaHS和內源性硫化氫合成酶（CSE）抑制劑PP

3、G預處理1h，再與Dil紅色熒光標記的氧化型低密度脂蛋白(Dil-ox-LDL)共孵育6h。采用激光共聚焦顯微鏡，活細胞工作站及流式細胞儀方法檢測巨噬細胞內吞ox-LDL的變化。
　　 2．采用不同濃度（25、50、100、200μmol/L)NaHS對Raw264.7細胞預處理1h，及100μmol/LNaHS處理細胞不同時間(10、30、60、120min)，再與ox-LDL共孵育24h，提取細胞蛋白，采用免疫熒光化學和蛋白

4、免疫印跡(western-blot)方法檢測ox-LDL受體LOX-1、CD36及C68蛋白的表達。
　　 3．使用NF-κB信號通路阻斷劑PDTC預處理細胞1h，后加入NaHS100μmol/L處理1h，再與ox-LDL共孵育24h，提取細胞蛋白，采用蛋白免疫印跡方法檢測LOX-1、CD36蛋白的表達。
　　 結果：
　　 1．外源性NaHS可明顯抑制巨噬細胞內吞ox-LDL的過程，而當加入內源性硫化氫合成酶抑

5、制劑PPG后可明顯增加巨噬細胞對ox-LDL的內吞，表明內源性H2S對內吞ox-LDL也有作用。
　　 2．NaHS處理后，巨噬細胞表面ox-LDL受體LOX-1、CD36及C68表達均有下調，且隨著NaHS濃度升高，處理時間延長，其抑制作用更加明顯，即NaHS呈濃度依賴性、時間依賴性抑制ox-LDL受體的表達。
　　 3．NaHS抑制LOX-1、CD36蛋白表達的作用可被NF-κB信號通路阻斷劑PDTC抑制，而ERK1

6、/2通路抑制劑PD98059可促進其抑制效應，表明H2S對LOX-1、CD36表達的抑制作用是通過NF-κB信號通路來實現(xiàn)的。
　　 結論：
　　 1．外源性和內源性H2S可抑制巨噬細胞內吞ox-LDL。
　　 2．H2S抑制巨噬細胞內吞ox-LDL的機制與下調ox-LDL受體LOX-1、CD36及C68表達有關。
　　 3．H2S下調ox-LDL受體LOX-1、CD36及C68的表達可能與NF-κB信號