CLA對Ox-LDL致HCAEC細(xì)胞損傷的保護(hù)及其機(jī)制.pdf

1、背景:動脈粥樣硬化(As)是導(dǎo)致全世界死亡和發(fā)病的主要原因，每年約有167萬人死亡。動脈粥樣硬化主要影響動脈中血管壁的內(nèi)膜層。動脈的內(nèi)皮細(xì)胞層為動脈粥樣硬化開始的早期部位，內(nèi)皮細(xì)胞的生理損傷或其功能紊亂在動脈粥樣硬化中有著極為重要的作用。脂蛋白主要存在于血漿中，其功能是轉(zhuǎn)運(yùn)內(nèi)、外源性的脂類物質(zhì)，低密度脂蛋白（ LDL）就是其中的一類。LDL經(jīng)氧化修飾形成氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL）。Ox-LDL已被證明參與了動脈粥樣硬化的形成過程，

2、其誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮損傷是動脈粥樣硬化的早期發(fā)病機(jī)制之一。凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體-1（LOX-1）是一個清道夫受體，主要結(jié)合并調(diào)節(jié) Ox-LDL。在血管內(nèi)皮細(xì)胞中，LOX-1受體是Ox-LDL的主要受體。共軛亞油酸（CLA）是一類不飽和的脂肪酸，因其生物活性對癌癥、糖尿病、肥胖以及動脈粥樣硬化有保護(hù)作用而備受關(guān)注，但其具體機(jī)制尚不明確。本課題主要探討CLA對Ox-LDL造成的人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞（HCAEC）損傷的影響及其相關(guān)機(jī)制。

3、r>　　目的:本課題體外培養(yǎng)人冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞（HCAEC），利用Ox-LDL誘導(dǎo)損傷HCAEC細(xì)胞，并用CLA對其進(jìn)行干預(yù)處理，探討CLA對Ox-LDL造成的HCAEC損傷的影響，進(jìn)一步研究 CLA對抗動脈粥樣硬化的作用，為動脈粥樣硬化的預(yù)防及其治療策略提供一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法:利用Ox-LDL刺激HCAEC細(xì)胞，構(gòu)建HCAEC細(xì)胞損傷模型，通過檢測細(xì)胞的生物學(xué)功能，如細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞活性、細(xì)胞增殖、細(xì)胞遷移等；以及對其分泌

4、的 NO、血管活性分子eNOS和ET-1、粘附分子VCAM-1的檢測，觀察研究共軛亞油酸（CLA）對其細(xì)胞損傷的影響。之后，通過對細(xì)胞損傷上下游分子的檢測，研究共軛亞油酸（CLA）對Ox-LDL致HCAEC細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制。
　　結(jié)果:
　　1.通過MTT法對HCAEC細(xì)胞活力進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示HCAEC的細(xì)胞活性隨著Ox-LDL濃度的增加而降低。CLA對Ox-LDL所造成的細(xì)胞活性下降有逆轉(zhuǎn)作用，而且此作用呈劑量依賴作用

5、。
　　2.對HCAEC細(xì)胞分泌的NO進(jìn)行檢測，和正常對照組相比，Ox-LDL可使 HCAEC分泌的NO量下降；和Ox-LDL組比較，經(jīng)CLA干預(yù)后 NO的含量明顯的升高。
　　3. Western Blot顯示，和正常對照組相比較，Ox-LDL組eNOS的表達(dá)明顯的減少，而CLA+ Ox-LDL組eNOS的表達(dá)高于Ox-LDL組；和正常對照組相比較，Ox-LDL組ET-1的表達(dá)明顯的升高，而CLA+ Ox-LDL組ET-1

6、的表達(dá)低于Ox-LDL組。
　　4. RT-PCR及Western Blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，Ox-LDL處理組細(xì)胞粘附分子VCAM-1的mRNA水平及蛋白水平表達(dá)量與正常對照組相比均明顯的增加；與Ox-LDL處理組相比較，CLA+ Ox-LDL組VCAM-1的mRNA水平及蛋白水平表達(dá)量降低。
　　5.與正常對照組相比較，Ox-LDL組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變，圓形細(xì)胞明顯增多，細(xì)胞間的間隙增大，細(xì)胞收縮，貼壁不緊，部分脫落；而CLA

7、+ Ox-LDL干預(yù)組細(xì)胞形態(tài)變化有所緩和，細(xì)胞間的間隙變小，形態(tài)趨于正常。
　　6. Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果均顯示，與正常對照組相比較，Ox-LDL處理組細(xì)胞遷移能力增強(qiáng)；與Ox-LDL處理組相比較，CLA+Ox-LDL組細(xì)胞的遷移能力下降。
　　7.經(jīng)流式細(xì)胞儀的檢測和Hoechst33258檢測，發(fā)現(xiàn)各處理組之間的細(xì)胞凋亡率無明顯差異。
　　8.和對照組相比，Ox-LDL組的p-JNK蛋白表達(dá)水平增