鋅指蛋白A20抑制ox-LDL誘導(dǎo)的平滑肌細胞損傷的實驗研究.pdf

1、目的：觀察ox-LDL對體外培養(yǎng)的大鼠主動脈血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)LOX-1、TLR-4 mRNA的表達情況、NF-к B活化及遷移能力的影響，并將含有鋅指蛋白A20基因的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染平滑肌細胞進行干預(yù)，觀察以上指標的變化，來探討鋅指蛋白A20對ox-LDL誘導(dǎo)．的VSMC損傷保護作用的可能效應(yīng)和機制。 方法：體外培養(yǎng)Sprague-Dawley(SD)大鼠主動脈VSMC

2、隨機分成4組：A組(為空白對照組，培養(yǎng)液中不加任何干預(yù)因素培養(yǎng)48小時)；B組(ox-LDL組，普通培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時，在培養(yǎng)基中加入50μg/ml的ox-LDL作用24小時)；C組(A20組，向VSMC轉(zhuǎn)染含A20基因的質(zhì)粒后培養(yǎng)48小時)；D組(ox-LDL+A20組，先向VSMC轉(zhuǎn)染含A20基因的質(zhì)粒，培養(yǎng)24小時后在培養(yǎng)基中加入50 μg/ml的ox-LDL作用24小時)；收集以上各組細胞，提取mRNA用RT-PCR的方法檢測L

3、OX-1、TLR-4 mRNA的表達；提取核蛋白用western blot的方法檢測NF-к B核易位的量；進行Boyden小室遷移實驗，觀察各組平滑肌細胞的遷移能力。 結(jié)果：ox-LDL(50 μg/ml)刺激大鼠主動脈VSMC 24小時后LOx-1、TLR-4 mRNA的表達及NF-кB的活化均明顯增加，平滑肌細胞遷移能力也顯著增強；轉(zhuǎn)染含A20基因質(zhì)粒的平滑肌細胞能完全抑制ox-LDL的以上作用，使TLR-4 mRNA的表

4、達、平滑肌細胞遷移能力達到正常水平，甚至能使LOX-1 mRNA的表達及NF-кB的核易位的量降低到正常水平以下。 結(jié)論： 1．ox-LDL能明顯激活平滑肌細胞NF-кB信號系統(tǒng)，并增強平滑肌細胞的遷移能力，可能由此激活動脈壁的炎癥反應(yīng)，誘導(dǎo)平滑肌遷移至內(nèi)膜。觸發(fā)動脈粥樣硬化發(fā)生。 2．ox-LDL能夠刺激VSMC LOX-1、TLR-4 mRNA的表達增加及遷移能力的增強，而LOX-1、TLR-4作為跨膜信號轉(zhuǎn)

5、導(dǎo)受體而起作甩，誘導(dǎo)動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展，因此ox-LDL誘導(dǎo)平滑肌細．胞LOX-1、TLR-4mRNA表達上調(diào)進一步擴大了LOX-1、TLR-4對血管壁細胞的損傷效應(yīng)，加速了動脈粥樣硬化的進展。 3．轉(zhuǎn)染含有A20基因的質(zhì)粒明顯抑制了ox-LDL誘導(dǎo)的平滑肌細胞LOX-1、TLR-4 mRNA表達的增加及VSMC遷移能力的增強，重要的是可能由此阻斷了ox-LDL引發(fā)的不斷級聯(lián)擴大的正反饋效應(yīng)，充分阻止了動脈粥樣硬化的發(fā)展；同