Ox-LDL誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)IL-6的機(jī)制及辛供伐他汀干預(yù)的研究.pdf

1、目的:觀察ox-LDL對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞表達(dá)IL-6的影響,探討TLR4/MAPK信號(hào)途徑在這一過程中的作用,同時(shí)研究辛伐他汀對(duì)IL-6表達(dá)的影響及可能機(jī)制。
　　 方法:組織貼塊法培養(yǎng)大鼠VSMCs,建立大鼠VSMCs體外培養(yǎng)模型,取3～5代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。①不同濃度的ox-LDL(25、50、1OOmg/L)干預(yù)VSMCs30min;不同時(shí)間點(diǎn)(0、5、15、30、45、60min)的ox-LDL(50mg/L)干預(yù)VSMC

2、s:及經(jīng)TLR4阻斷劑TLR4中和抗體預(yù)處理后,ox-LDL(50mg/L)干預(yù)VSMCs。采用WesternBlot法檢測(cè)ERK1/2、P38和JNK的蛋白表達(dá)。②不同濃度的ox-LDL(25、50、100mg/L)干預(yù)VSMCs,采用RT-PCR檢測(cè)IL-6mRNA表達(dá),ELISA法檢測(cè)IL-6的分泌水平。③分別經(jīng)P38抑制劑SB203580、ERK1/2抑制劑PD98059、JNK抑制劑SP600125、TLR4阻斷劑TLR4中和

3、抗體預(yù)處理VSMCs,然后以ox-LDL(50mg/L)干預(yù)。采用RT-PCR檢測(cè)IL-6mRNA的表達(dá),ELISA法檢測(cè)IL-6的分泌水平。④應(yīng)用不同濃度的辛伐他汀(0.1、1、10μmol/L)預(yù)處理VSMCs,然后以ox-LDL(50mg/L)干預(yù)。采用RT-PCR檢測(cè)TLR4mRNA的表達(dá),ELISA法檢測(cè)IL-6的分泌水平,Western Blot法檢測(cè)ERK1/2、P38的蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 ①o

4、x-LDL在25～100mg/L范圍內(nèi)呈濃度依賴性地使P-ERK1/2、P-P38、P-JNK的蛋白表達(dá)升高,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ②不同時(shí)間點(diǎn)的ox-LDL(50mg/L)干預(yù)VSMCs后,與0min對(duì)照組比較,P-ERK1/2、P-P38和P-JNK的表達(dá)在15min時(shí)開始升高。其中P-ERK1/2的表達(dá)于45min時(shí)達(dá)高峰,而P-P38的表達(dá)在30min時(shí)達(dá)到高峰。P-JNK的表達(dá)在干預(yù)15min與30mi

5、n之間比較差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,而在干預(yù)30min與45min之間比較有顯著性差異。
　　 ③與ox-LDL(50mg/L)組比較,TLR4中和抗體預(yù)處理組中P-ERK1/2的表達(dá)明顯下降,P-P38的表達(dá)明顯下降,P-JNK的表達(dá)明顯下降。
　　 ④ox-LDL在25～100mg/L范圍內(nèi)濃度依賴性地使IL-6mRNA的表達(dá)及IL-6的分泌水平升高,與對(duì)照組比較差異皆有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 ⑤分別與ox-LDL(5

6、0mg/L)組中IL-6mRNA的表達(dá)(0.741±0.033)和IL-6的分泌水平(831.8±127.6)相比,經(jīng)阻斷劑SB203580、PD98059和TLR4中和抗體預(yù)處理后,IL-6mRNA的表達(dá)(0.482±0.010、0.375±0.019和0.471±0.030)和IL-6的分泌水平(400.1±68.4、373.6±104.5和381.8±97.0)明顯下調(diào);而經(jīng)SP600125預(yù)處理后,IL-6mRNA的表達(dá)及IL-

7、6的分泌水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 ⑥分別與對(duì)照組,ox-LDL(50mg/L)組相比,辛伐他汀在0.1～10μmol/L濃度范圍內(nèi)呈濃度依賴性抑制IL-6的分泌水平、TLR4mRNA的表達(dá)和ERK1/2、P38磷酸化水平的上調(diào)。其中單純辛伐他汀組對(duì)細(xì)胞表達(dá)IL-6,TLR4mRNA及P-ERK1/2、P-P38與對(duì)照組相比略有下降,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論:
　　 ①ox-LDL能夠上調(diào)VSMCs中IL-6