瑞舒伐他汀對ox-LDL誘導的人單核巨噬細胞MMP-9mRNA和蛋白表達的影響.pdf

1、研究背景和目的：氧化低密度脂蛋白（Oxidized low density lipoprotein，Ox-LDL)作為獨立的危險因素在動脈粥樣硬化（Atherosclerosis，AS）的發(fā)生、發(fā)展及急性冠脈綜合征（Acute coronary syndrome, ACS）形成中占有重要的地位，在動脈粥樣硬化中ox-LDL除了直接導致內皮損傷外，還可以引起單核細胞趨化、巨噬細胞源泡沫細胞形成和細胞毒性產生,并且可以調節(jié)粥樣斑塊內血管內皮

2、細胞、平滑肌細胞和巨噬細胞等多種細胞和生長因子的合成[1]。有研究發(fā)現(xiàn),ox-LDL 可增加單核細胞源巨噬細胞MMP-9的蛋白表達并增強其活性，是細胞功能和基因表達的主要調節(jié)因子[2]。Ox-LDL 可刺激人單核巨噬細胞MMP-9的基因表達，增加基質金屬蛋白酶的活性，有可能促進粥樣硬化斑塊內基質的降解，形成易損的斑塊，并且，在ox-LDL 存在下, MMP-9表達維持在較高水平，MMP-9 過度的表達則抑制平滑肌增殖，促使其凋亡，減弱斑

3、塊穩(wěn)定性,參與了斑塊破裂的進程，促進粥樣硬化病變和血栓的形成。瑞舒伐他汀(Rosuvastatin)是新一代的HMG-COA還原酶抑制劑,能顯著降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、甘油三脂(TG)及升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C),是一種被攝入后易于進入動脈內膜的抗氧化質，它對ox-LDL所誘導的單核巨噬細胞（Monocyte-macrophage cells）表達MMP-9mRNA和蛋白的影響及其機制尚不十分明確。目的：討瑞舒伐

4、他汀對ox-LDL 誘導的健康人單核巨噬細胞基質金屬蛋白酶-9(MMP-9)mRNA及蛋白表達的影響及影響途徑和可能機制。
　　 研究方法：體外密度梯度離心法分離并培養(yǎng)健康人血中的單核巨噬細胞，用特異性熒光素標記的CD14細胞表面抗體,流式細胞術進行細胞鑒定，并傳至2—4代用于實驗單核巨噬細胞培養(yǎng)24 h作為空白對照組,ox-LDL 100mg/mL培養(yǎng)24 h作為ox-LDL對照組,實驗組分別用ox-LDL 100mg/mL培

5、養(yǎng)2 h后，各加入不同劑量瑞舒伐他汀(0.010.11.010.0umol/L)共同作用24 h。分別提取各組細胞的RNA，用半定量逆轉錄聚合酶鏈式反應法(RT-PCR)，測定MMP-9 mRNA表達，用ELISA法測定MMP-9的蛋白含量。
　　 研究結果：單核巨噬細胞經培養(yǎng)?誘導后,25×16倍倒置顯微鏡光鏡下觀察,部分細胞為多角形,并且易于聚積?貼壁,說明已由單核細胞分化為巨噬細胞，經流式細胞術進行細胞鑒定,鑒定細胞多為單

6、核巨噬細胞,符合實驗要求，對ox-LDL誘導的單核巨噬細胞MMP-9 mRNA表達的影響與空白對照組比較,ox-LDL對照組MMP-9 mRNA表達明顯增加(P<0.05)，與空白對照組比較,ox-LDL誘導后不同劑量（0.01μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L;10.0μmol/L)瑞舒伐他汀組MMP-9 mRNA表達也增加(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;與ox-LDL對照組比較,不同劑量瑞舒伐他汀組MMP-9

7、mRNA表達明顯降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;ox-LDL誘導后,不同劑量瑞舒伐他汀各組之間比較,隨著瑞舒伐他汀劑量增加,MMP-9 mRNA表達逐漸降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義?對ox-LDL誘導的單核巨噬細胞MMP-9蛋白表達的影響與空白對照組比較,ox-LDL對照組MMP-9蛋白表達明顯增加(P<0.05)。與ox-LDL對照組比較,不同劑量(0.01μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L?1

8、0.0μmol/L)瑞舒伐他汀組MMP-9蛋白表達明顯降低(P<0.05),這種降低隨著瑞舒伐他汀劑量的增加而愈加顯著; ox-LDL誘導后,不同劑量瑞舒伐他汀組之間比較,隨著瑞舒伐他汀劑量增加,MMP-9蛋白表達逐漸降低(P<0.05),差異具有統(tǒng)計學意義;ox-LDL誘導后加入不同劑量瑞舒伐他汀,除了瑞舒伐他汀10.0μmol/L組與與空白對照組比較,MMP-9蛋白表達沒有增加(P>0.05),差異無統(tǒng)計學意義外,其余各劑量(0.0

9、1μmol/L，0.1μmol/L，1.0μmol/L)組與空白對照組比較,MMP-9蛋白表達均增加,差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表1)?說明瑞舒伐他汀10.0μmol/L幾乎完全抑制了MMP-9蛋白的表達。
　　 研究結論：
　　 （1）證實外周血單核巨噬細胞在ox-LDL 誘導后,MMP-9 mRNA和蛋白含量明顯增加。
　　 （2）瑞舒伐他汀呈劑量依賴性,可能通過ox-LDL 途徑來下調人單核巨噬