辛伐他汀聯(lián)合替格瑞洛對ox-LDL誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細胞vWF表達的影響.pdf

1、目的：隨著對血管內(nèi)皮細胞(vascular endothelial cells, VEC)功能方面的深入研究，VEC功能障礙在動脈硬化疾病的發(fā)病機制中起著重要作用,例如：心血管和腦血管疾病等。血管內(nèi)皮細胞具備多種功能，它參與人體內(nèi)多種重要的平衡的調(diào)節(jié)，并且具備極強的代謝能力，細胞受損后可釋放多種細胞活性因子，用以維持血管的舒張和收縮，在器官的缺血、炎癥、免疫等一系列反應(yīng)中起著重要的作用。同時它不僅對白細胞活性、血小板聚集中起著重要作用，

2、同時對血液凝固亦起到重要的作用。為改善心腦血管疾病患者的預(yù)后，深入研究如何改善血管內(nèi)皮細胞功能就顯得尤為重要了。
　　血管性假血友病因子（vWF），在凝血過程中發(fā)揮重要作用。vWF在血中表達水平的高低與血管內(nèi)皮細胞受損的程度呈正相關(guān)，目前被認為是反映VEC功能的最好指標[4]。替格瑞洛(Ticagrelor)于2012年底在中國大陸上市，它直接作用P2Y12受體，達到抑制血小板聚集的目的，且這種阻斷具有可逆性。
　　研究證明

3、，他汀類藥物，比如辛伐他汀，可以改善血管內(nèi)皮功能，這種作用是通過多種途徑來實現(xiàn)的。替格瑞洛已經(jīng)在急性心血管疾病的治療中體現(xiàn)出來了優(yōu)勢，但由于替格瑞洛上市時間尚短，關(guān)于替格瑞洛除了抗血小板作用以外，是否也像他汀類藥物一樣，還具有改善內(nèi)皮功能等的作用，國內(nèi)外均研究尚少；同時，替格瑞洛聯(lián)合他汀類藥物治療的同時，是否能加強他汀類藥物調(diào)脂外的作用亦研究尚少。本實驗將對其藥物的多效性進行研究，將來可能會在心腦血管疾病及糖尿病血管病變的預(yù)防和治療中提

4、供新的思路。
　　方法：離體培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細胞CRL-1730，以lxlO/mL接種于6孔板內(nèi)，每孔為200ul。1、細胞復(fù)蘇后，細胞傳代培養(yǎng)2-3代，分別以濃度為0ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的ox-LDL處理細胞24小時，觀察細胞生長狀態(tài)，并通過Western Blot印跡法測定細胞vWF的蛋白表達量，并依據(jù)測定結(jié)果選擇最佳濃度的ox-LDL。2、根據(jù)第一步實驗的結(jié)果，本實驗選擇 ox-LDL的誘導(dǎo)濃度為50

5、ug/ml。實驗分組：（1）空白對照組；（2）ox-LDL誘導(dǎo)組；（3）ox-LDL誘導(dǎo)+辛伐他汀干預(yù)組；（4）ox-LDL誘導(dǎo)+替格瑞洛（低濃度）干預(yù)組；（5）ox-LDL誘導(dǎo)+替格瑞洛（高濃度）干預(yù)組；（6）ox-LDL誘導(dǎo)+辛伐他汀與替格瑞洛聯(lián)合干預(yù)組。24后采用Western Blot法測定vWF的蛋白表達水平。
　　結(jié)果：
　　1、根據(jù)Western Blot結(jié)果顯示，50ug/ml、100ug/ml濃度的ox-L

6、DL均能明顯上調(diào)vWF的表達，高濃度（100ug/ml）ox-LDL組vWF的蛋白表達量明顯高于50ug/ml組。但在顯微鏡下觀察，100ug/mlox-LDL組的細胞狀態(tài)較差，考慮到下一步還需要用藥物進一步進行干預(yù)，故將選擇50ug/ml濃度的ox-LDL進行誘導(dǎo)。
　　2、Western Blot結(jié)果顯示，各 ox-LDL誘導(dǎo)組的vWF的蛋白表達明顯高于非誘導(dǎo)組（空白對照組）（均p<0.05）;在ox-LDL誘導(dǎo)組中，辛伐他汀

7、組、低濃度替格瑞洛組及高濃度替格瑞洛組的vWF的蛋白表達均低于空白對照組，（均p<0.05）；辛伐他汀與替格瑞洛聯(lián)合干預(yù)組的vWF的蛋白表達均低于空白對照組、辛伐他汀組及替格瑞洛組（均p<0.05）。
　　結(jié)論：ox-LDL能提高vWF的蛋白表達；辛伐他汀及替格瑞洛均能下調(diào)vWF的蛋白表達，這種下調(diào)作用在一定范圍內(nèi)與濃度正相關(guān)；辛伐他汀與替格瑞洛聯(lián)合較單獨予辛伐他汀或替格瑞洛使下調(diào) vWF的蛋白表達更為明顯。因此我們可以得出結(jié)論，