辛伐他汀納米粒對(duì)脂多糖刺激的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　初步嘗試辛伐他汀納米粒的制備，研究其理化性質(zhì)，并探討其對(duì)脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激的體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響。
　　方法:
　　(1)采用溶劑擴(kuò)散法方法制備辛伐他汀納米粒，粒度與Zeta電位分析儀測(cè)定納米粒粒徑，以高效液相色譜法測(cè)定藥物包封率和載藥量。(2)采用胰酶消化法進(jìn)行人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)，以免疫組化法對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行鑒定。(3)通過LPS刺激臍靜脈內(nèi)皮細(xì)

2、胞制造膿毒癥細(xì)胞模型，分為空白對(duì)照組，LPS組，辛伐他汀靜脈制劑組（LPS+辛伐他汀靜脈制劑）及辛伐他汀納米粒組（LPS+辛伐他汀納米粒），培養(yǎng)6h，12h，24h，予MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性。共培養(yǎng)12h后流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞調(diào)亡率，并用蛋白印跡法(western blot)檢測(cè)四組Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)采用溶劑擴(kuò)散法成功制備辛伐他汀納米粒，測(cè)其直徑在350.3±156.9nm，包封率65.71％

3、，載藥量3.29％。(2)原代臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞梭形，連接呈片后顯現(xiàn)內(nèi)皮細(xì)胞形狀，呈鋪路石樣。人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Ⅷ因子相關(guān)抗原抗體鑒定為內(nèi)皮細(xì)胞。(3)細(xì)胞活性比較:共培養(yǎng)6h后LPS組的細(xì)胞活性明顯低于空白對(duì)照組(P＜0.05)，辛伐他汀靜脈制劑組及辛伐他汀納米粒組細(xì)胞活性均高于LPS組(P＜0.05)，辛伐他汀納米粒組細(xì)胞活和辛伐他汀靜脈制劑組活性無明顯差別(P＞0.05)。共培養(yǎng)12h及24h細(xì)胞活性比較:LPS組的細(xì)胞活性明顯低于空白

4、對(duì)照組(P＜0.05)，辛伐他汀靜脈制劑組及辛伐他汀納米粒組細(xì)胞活性均高于LPS組(P＜0.05)，辛伐他汀納米粒組細(xì)胞活性高于辛伐他汀靜脈制劑組(P＜0.05)。12h和24h組間活性無明顯差異。共培養(yǎng)12h后，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率結(jié)果:LPS組的凋亡率明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)，辛伐他汀靜脈制劑組凋亡率及辛伐他汀納米粒組均低于LPS組(P＜0.05)，辛伐他汀納米粒組凋亡率低于辛伐他汀靜脈制劑組(P＜0.05)。West

5、ern Blot檢測(cè)各組Bcl-2，Bax蛋白結(jié)果:LPS組Bcl-2蛋白的表達(dá)低于空白對(duì)照組(P＜0.05)，Bax蛋白的表達(dá)明顯高于空白對(duì)照組(P＜0.05)。辛伐他汀靜脈制劑組及辛伐他汀納米粒組Bcl-2蛋白的表達(dá)均高于LPS組(P＜0.05)，低于空白對(duì)照組((P＜0.05)，Bax蛋白的表達(dá)明顯低于LPS組(P＜0.05)，高于空白對(duì)照組(P＜0.05)。辛伐他汀納米粒組Bcl-2蛋白的表達(dá)高于辛伐他汀靜脈制劑組(P＜0.05

6、)，Bax蛋白的表達(dá)低于辛伐他汀靜脈制劑組(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　(1)采用溶劑擴(kuò)散法方法制備的辛伐他汀納米粒粒徑小，包封率及載藥量較好;(2) LPS可能通過降低Bcl-2蛋白表達(dá)，提高Bax蛋白表達(dá)而明顯增加人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率;(3)辛伐他汀靜脈制劑及辛伐他汀納米粒能提高LPS刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的活性，降低其細(xì)胞凋亡率，其可能機(jī)制為提高LPS刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞Bcl-2蛋白的表達(dá)，而降低Bax蛋白的表