Ox--LDL對大鼠血管平滑肌細胞OPG及RANKL表達的影響.pdf

1、目的:觀察氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)對大鼠胸主動脈血管平滑肌細胞(VSMCs)骨保護素(Osteoprotegerin，OPG)及核因子-κB受體活化因子配體(Receptor Activator of NF-κB Ligand，RANKL)表達的影響，進而探索動脈粥樣硬化形成機制。
　　方法:本實驗通過體外培養(yǎng)大鼠VSMCs細胞株(A7R5)，分別進行下列實驗:①向A7R5內分別加入含不同濃度Ox-LDL（0、100μg

2、/ml）的10％胎牛血清(FBS)培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時間(24h)，用免疫熒光法(IF Method)檢測OPG、RANKL表達情況。②向A7R5內分別加入含不同濃度Ox-LDL（0、25、50、75、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時間(24h)，用實時定量PCR法(Real-Time PCR)觀察OPG、RANKL mRNA表達，用免疫共沉淀法(Western Blot)檢測OPG、RANKL蛋白表達。③向A7R5內加入含

3、相同濃度Ox-LDL(100μg/ml)的10％FBS培養(yǎng)液，分別處理不同時間(0、4、8、12、24 h)，用Real-Time PCR觀察OPG、RANKL mRNA表達，用Western Blot檢測OPG、RANKL蛋白表達。
　　結果:①A7R5經(jīng)含不同濃度Ox-LDL（0、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)24 h，運用細胞免疫熒光技術觀察到實驗組(Ox-LDL，100μg/ml) OPG蛋白表達增強，而RAN

4、KL蛋白表達下降，與空白組（Ox-LDL，0μg/ml）具有顯著差異(P＜0.05)。②A7R5經(jīng)含不同濃度Ox-LDL（0、25、50、75、100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)相同時間(24h)，運用Real-Time PCR觀察到隨著Ox-LDL濃度不斷增加，OPG mRNA表達呈上升趨勢，而RANKL mRNA表達呈現(xiàn)下降趨勢，且兩兩對比統(tǒng)計皆存在顯著差異（P＜0.05）;通過Western Blot發(fā)現(xiàn)隨著Ox-LDL濃

5、度不斷增加，OPG蛋白的表達呈上升趨勢，而RANKL蛋白的表達呈現(xiàn)下降趨勢，且兩兩對比統(tǒng)計皆存在顯著差異（P＜0.05）。③A7R5經(jīng)含相同濃度Ox-LDL（100μg/ml）的10％FBS培養(yǎng)液培養(yǎng)不同時間(0、4、8、12、24h)，運用Real-Time PCR觀察到OPG mRNA表達隨著培育時間延長逐漸升高，而RANKL mRNA表達逐漸降低，且各組間對比統(tǒng)計皆具有顯著差異（P＜0.05）;通過Western Blot發(fā)現(xiàn)OP