胰島素對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞RANKL表達(dá)影響及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的研究.pdf

1、第一章:胰島素促進(jìn)大鼠體外鈣化型血管平滑肌細(xì)胞RANKL表達(dá)
　　 目的：本部分研究探討胰島素對(duì)大鼠體外鈣化型血管平滑肌細(xì)胞(calcifying vascular smooth muscle cells,CVSMCs)RANKL(receptoractivator of NF-kB Ligand，核因子kB配體的受體激動(dòng)劑)表達(dá)的影響。
　　 方法：取不同濃度及時(shí)間點(diǎn)，用胰島素干預(yù)大鼠CVSMCs。應(yīng)用RT-PCR和E

2、LISA方法分別測(cè)定CVSMCs RANKL mRNA和RANKL蛋白在大鼠CVSMCs的表達(dá)。
　　 結(jié)果：1．胰島素促進(jìn)CVSMCs RANKL mRNA和RANKL蛋白的表達(dá)。2．胰島素呈時(shí)間依賴性CVSMCs RANKL mRNA表達(dá)。
　　 結(jié)論：胰島素促進(jìn)大鼠CVSMCs RANKL表達(dá)。
　　
　　 第二章:胰島素激活ERKI/2信號(hào)途徑促進(jìn)大鼠鈣化型血管平滑肌細(xì)胞RANKL表達(dá)
　

3、　 目的：在上部分研究發(fā)現(xiàn)，胰島素能夠促進(jìn)大鼠體外CVSMCsRANKL表達(dá)，但其具體分子機(jī)制未明確。因此，本部分研究旨在探討胰島素促進(jìn)大鼠CVSMCs RANKL表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制。
　　 方法：胰島素以及聯(lián)合ERK1/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑PD98059、PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑LY294002和Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑HIMO干預(yù)大鼠CVSMCs，利用Western Blot檢測(cè)p-ERKl/2，ERKl/2，p-Akt，Akt的表

4、達(dá)情況。胰島素以及聯(lián)合ERKl/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑PD98059、PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑LY294002和Akt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑HIMO干預(yù)大鼠CVSMCs，利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)RANKL mRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：1．胰島素誘導(dǎo)大鼠CVSMCs ERKl/2以及Akt磷酸化。2.ERKl/2信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑PD98059干預(yù)組抑制胰島素促進(jìn)大鼠CVSMCs RANKL mRNA表達(dá)增加效應(yīng)，而PI3K信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)阻斷劑LY29