血管緊張素Ⅱ及氧化低密度脂蛋白對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞Smurf2表達(dá)的影響.pdf

1、目的:通過研究不同濃度的氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)、血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)及轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)Smurf2和Ⅰ型膠原(collagen typeⅠ,CⅠ)表達(dá)的影

2、響,進(jìn)一步研究影響轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)信號(hào)通路的不同因素,初步探討導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化和高血壓形成不同病變的作用機(jī)制,并期望能夠?yàn)閯?dòng)脈粥樣硬化的治療尋找新的作用靶點(diǎn)。
　　方法:取3-10代生長(zhǎng)狀態(tài)良好的VSMCs進(jìn)行培養(yǎng),每瓶接種DMEM液5ml(含10％胎牛血清、100μg/ml鏈霉素、100U/ml青霉素),待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)至70％-80％融合時(shí),改用無血清

3、的DMEM(含0.2％胎牛血清)培養(yǎng)24小時(shí),使其同步化在靜止期。然后分為五組:正常對(duì)照組、AngⅡ作用組、ox-LDL作用組、TGF-β1作用組、AngⅡ和ox-LDL共作用組并給予不同濃度藥物作用24小時(shí)后,采用RT-PCR和Western blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞中Smurf2 mRNA及蛋白的表達(dá)水平,ELISA法測(cè)細(xì)胞上清液中Ⅰ型膠原的濃度,最后利用SPSS13.0軟件包對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

4、義。
　　結(jié)果:PT-PCR和Western blot法檢測(cè)各組Smurf2的表達(dá)變化,ELISA法測(cè)Ⅰ型膠原的濃度:1)不同濃度TGF-β1(1、5、10μg/L)作用于VSMCs后,細(xì)胞中Smurf2的表達(dá)水平均低于對(duì)照組(P<0.05),且5μg/L、10μg/L組同對(duì)照組相比P<0.01,Ⅰ型膠原的濃度高于對(duì)照組(P<0.05),且5μg/L組同對(duì)照組相比P<0.01;2)不同濃度AngⅡ(10-7、10-6、10-5mo

5、l/L)作用于VSMCs后,細(xì)胞中Smurf2的表達(dá)量均低于對(duì)照組(P<0.05),且10-5、10-6mol/L組同對(duì)照組相比P<0.01,細(xì)胞分泌Ⅰ型膠原的濃度高于對(duì)照組(P<0.05);3)不同濃度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同對(duì)照組相比Smurf2的表達(dá)量升高(P<0.01),Ⅰ型膠原的濃度低于對(duì)照組(P<0.05),40mg/L組同對(duì)照組相比P<0.01;4)以AngⅡ(10-5mol/L)聯(lián)

6、合不同濃度ox-LDL(20、40、80mg/L)作用大鼠VSMCs后,同對(duì)照組相比,AngⅡ(10-5mol/L)聯(lián)合ox-LDL(20、40、80mg/L)Smurf2的表達(dá)量升高(P<0.05)且20mg/L、80mg/L組同對(duì)照組相比P<0.01。同對(duì)照組相比,20mg/L聯(lián)合組的Ⅰ型膠原濃度無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,40、80mg/L聯(lián)合組同對(duì)照組相比P<0.05。
　　結(jié)論:1)TGF-β1抑制Smurf2的表達(dá),促進(jìn)Ⅰ型膠原的產(chǎn)