冷應(yīng)激對(duì)大鼠血管平滑肌細(xì)胞鈣通道表達(dá)的影響.pdf

1、目的：
　　 觀察大鼠及體外培養(yǎng)的大鼠血管平滑肌細(xì)胞(VSMC)暴露于低溫條件并持續(xù)不同時(shí)間后，血壓及血管平滑肌細(xì)胞上鈣通道α1C亞基表達(dá)的變化。
　　 方法：
　　 ①動(dòng)物分組及冷應(yīng)激高血壓模型的建立：選用健康成年SD大鼠24只，體重150-180克，完全隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組又分為2、4、6周組，每組6只。對(duì)照組大鼠在室溫下(25±1℃)飼養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組大鼠每天置于(4±1)℃、相對(duì)濕度為70％的氣候箱中

2、4小時(shí)，2、4、6周組大鼠接受寒冷刺激時(shí)間分別為持續(xù)2、4、6周；血壓測量：于實(shí)驗(yàn)兩周前開始測量血壓，每周3次，每次在大鼠安靜狀態(tài)測量，讀數(shù)5次，取其平均值；大鼠主動(dòng)脈VSMC的分離及應(yīng)用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測主動(dòng)脈鈣離子通道α1C亞基的表達(dá)：腹腔麻醉后將SD大鼠處死，取出胸主動(dòng)脈，游離出血管中膜，剪成小塊，在RNA提取試劑Trizol中充分勻漿。根據(jù)試劑盒的說明進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，半定量檢測主動(dòng)脈鈣離子通道α

3、1C亞基的表達(dá)。
　　 ②貼壁法培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈VSMC。將細(xì)胞暴露低溫(4±1)℃，分別暴露2、4、6小時(shí)。應(yīng)用流式檢測各組VSMC內(nèi)鈣離子濃度及半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測各組VSMC鈣離子通道α1C亞基mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.大鼠的收縮壓變化：在冷應(yīng)激環(huán)境中大鼠血壓升高。實(shí)驗(yàn)組大鼠血壓從第2周開始升高，2周冷應(yīng)激大鼠模型血壓為(102.8±2.25)mmHg，對(duì)照組大鼠血壓為

4、(89.16±3.73)mmHg，兩組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)；第4、6周冷應(yīng)激大鼠模型血壓分別為(114.53±4.21)mmHg、(121.94±3.03)mmHg，與對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。
　　 2.寒冷暴露組血管平滑肌鈣離子通道α1C亞基mRNA水平變化：與對(duì)照組相比，暴露組大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌鈣離子通道α1CmRNA的表達(dá)從第2周開始增加，到第6周達(dá)到最高，對(duì)照組鈣離子通道α1C亞基m

5、RNA的相對(duì)表達(dá)量為(0.13±0.02)，2、4、6周冷應(yīng)激大鼠模型鈣離子通道α1C亞基mRNA的相對(duì)表達(dá)量分別為(0.21±0.02)、(0.33±0.05)、(0.57±0.08)，與對(duì)照組相比有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.01)。
　　 3.鈣通道α1C亞基mRNA相對(duì)表達(dá)量與血壓的有顯著相關(guān)性：大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌鈣離子通道α1 CmRNA相對(duì)表達(dá)量和寒冷暴露后大鼠血壓變化運(yùn)用SPSS13.0軟件進(jìn)行相關(guān)分析(Pearso

6、n分析)，相關(guān)系數(shù)為0.86(p<0.01)。
　　 4。倒置相差顯微鏡下觀察VSMC為梭形、長梭形，排列成放射狀，呈典型“谷”與“峰”生長現(xiàn)象，陽性率在95％以上。
　　 5.寒冷暴露的主動(dòng)脈VSMC鈣離子濃度的變化：與對(duì)照組相比，冷刺激大鼠主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度增高，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(對(duì)照組：42.68±8.92 nmol/L，寒冷暴露2小時(shí)組86.81±9.87 nmol/L，寒冷暴露4小時(shí)組135.76

7、±10.46 nmol/L，寒冷暴露6小時(shí)組184.59±11.52 nmol/L)。隨著冷刺激時(shí)間的延長，血管平滑肌內(nèi)的鈣離子濃度不斷增加，兩兩比較差異明顯(P<0.05)。
　　 6.寒冷暴露組血管平滑肌細(xì)胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA表達(dá)增加，對(duì)照組鈣離子通道α1C亞基的mRNA為(0.42±0.03)，分別暴露2、4、6小時(shí)的血管平滑肌細(xì)胞鈣離子通道α1C亞基的mRNA分別為(0.49±0.04)、(0.58±0.06