羅格列酮對大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　觀察羅格列酮對大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡及磷酸化Smad2/3和P21cip1表達(dá)的影響。
　　方法:
　　1)酶消化法原代提取 SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),取5-8代細(xì)胞進(jìn)行實驗。無血清培養(yǎng)培養(yǎng)24小時后:1)分四組,對照組、羅格列酮組(本實驗所用羅格列酮均為100umol/L)、羅格列酮+ GW9662(PPAR-γ阻斷劑)組、羅格列酮+anti-TGF-β1(抗TGF-β1抗體)組,分別用We

2、stern blot于1小時時檢測p-Smad2/3水平,于2小時時檢測P21cip1水平,24小時后流式細(xì)胞學(xué)檢測細(xì)胞凋亡;
　　2)分二組,對照組、100umol/L羅格列酮組,分別于0、0.5、1、2、6、12、24小時,用Western-blot檢測p-Smad2/3和P21cip1水平。
　　結(jié)果:
　　觀察發(fā)現(xiàn)24小時后羅格列酮組細(xì)胞凋亡率較對照組明顯升高(P〈0.05),羅格列酮+GW9662組和羅格列酮

3、+anti-TGF-β1組細(xì)胞凋亡率較羅格列酮組明顯降低(P〈0.05),提示GW9662和anti-TGF-β1均可逆轉(zhuǎn)羅格列酮誘導(dǎo)的VSMC凋亡。羅格列酮處理后0.5小時VSMC p-Smad2/3表達(dá)水平明顯高于對照組(P〈0.05),且1小時達(dá)高峰(P〈0.05), p-Smad2/3水平達(dá)到高峰后又較快下降( P〈0.05),提示羅格列酮可誘導(dǎo) VSMC p-Smad2/3的表達(dá)增加;并且羅格列酮+ GW9662組和羅格列酮+

4、anti-TGF-β1組p-Smad2/3表達(dá)水平較羅格列酮組低(P〈0.05),提示PPAR-γ阻斷劑GW9662和anti-TGF-β1可逆轉(zhuǎn)羅格列酮誘導(dǎo)的p-Smad2/3表達(dá)增加。羅格列酮處理后1時P21cip1水平明顯高于對照組(P〈0.05),且2小時達(dá)到高峰(P〈0.05), P21cip1水平達(dá)到高峰后又緩慢下降(P〈0.05),提示羅格列酮可誘導(dǎo) VSMC P21cip1表達(dá);并且羅格列酮+ GW9662組P21cip