阿托伐他汀對Aβ-,1-42-誘導(dǎo)AD大鼠模型抗炎作用的研究.pdf

1、目的：探討阿托伐他汀對β淀粉樣蛋白1-42(β-amyloid 1-42，Aβ1-42)誘導(dǎo)阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)大鼠模型的抗炎作用。通過研究阿托伐他汀對AD大鼠模型的認(rèn)知功能障礙，海馬組織形態(tài)改變及海馬區(qū)炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的產(chǎn)生等方面的保護(hù)作用，從抗炎方面闡明阿托伐他汀神經(jīng)保護(hù)作用的機(jī)制。 方法： 選用健康雄性Wistar大鼠60只，體重250g-300g

2、，將其完全隨機(jī)分為四組：對照組15只，模型組15只，他汀對照組15只和治療組15只。模型組和治療組采用側(cè)腦室注射Aβ的方法制備大鼠癡呆模型-用無菌生理鹽水將Aβ1-42(sigma產(chǎn)品)溶解稀釋至5ug/ul，37℃孵育72h，使其變?yōu)榫奂瘧B(tài)的Aβ1-42。通過立體定向儀向大鼠左側(cè)腦室注入聚集態(tài)的Aβ1-422ul。對照組和他汀對照組大鼠側(cè)腦室內(nèi)注射無菌生理鹽水2ul。他汀對照組和治療組給與阿托伐他汀5mg/kg/d灌胃三周，對照組和模

3、型組以生理鹽水為對照。 三周后行側(cè)腦室注射制作動(dòng)物模型，術(shù)后取6h、1周兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，麻醉大鼠，生理鹽水及4％多聚甲醛進(jìn)行心內(nèi)灌注，取腦，制作病理標(biāo)本，免疫組織化學(xué)方法測定海馬區(qū)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達(dá)，HE染色觀察海馬區(qū)形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化，尼氏染色觀察神經(jīng)元凋亡。術(shù)后1周各組取一只大鼠，麻醉后取新鮮腦組織，制作電鏡標(biāo)本，透射電鏡觀察海馬區(qū)神經(jīng)元和小膠質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的變化。術(shù)后第21天，各組進(jìn)行Morris水迷宮

4、訓(xùn)練5天，記錄成績，觀測大鼠的認(rèn)知功能變化。 結(jié)果： 1.阿托伐他汀對大鼠認(rèn)知能力的影響進(jìn)行Morris水迷宮訓(xùn)練過程中，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，記錄第5d的成績，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理后發(fā)現(xiàn)，模型組較對照組逃避潛伏期明顯延長(41.3±3.4s)，撤離平臺(tái)后在原平臺(tái)象限內(nèi)游泳的時(shí)間占整個(gè)游泳時(shí)間的百分比顯著降低(21.20±1.28％)，穿過原平臺(tái)位置的次數(shù)明顯減少(3.6±1.517)，具有顯著性差異(P<0.01)；治療組

5、與模型組相比較，逃避潛伏期縮短(15.7±1.6s)，撤除平臺(tái)后治療組大鼠在原平臺(tái)象限內(nèi)游泳時(shí)間百分比升高(38.80±2.59)，穿過平臺(tái)位置的次數(shù)增多(7.2±1.789)，且差異具有顯著性(P<0.01)；他汀對照組與對照組比較，差異無顯著性。 2.各組大鼠海馬區(qū)組織病理及超微結(jié)構(gòu)觀察HE染色：術(shù)后1周對照組海馬神經(jīng)細(xì)胞呈橢圓形，排列整齊緊密，染色均一，細(xì)胞核圓且大，核仁清晰。模型組海馬神經(jīng)細(xì)胞層次明顯減少，細(xì)胞排列稀疏，

6、細(xì)胞核深染、固縮為三角形或多角形，大量膠質(zhì)細(xì)胞增生。他汀治療組海馬神經(jīng)細(xì)胞排列較模型組整齊，細(xì)胞呈圓形或橢圓形，核仁清晰，細(xì)胞脫失較少見，反應(yīng)性膠質(zhì)細(xì)胞減少明顯減輕。 超微電鏡：對照組大部分神經(jīng)元結(jié)構(gòu)正常，胞核常染色質(zhì)為主、核圓，細(xì)胞內(nèi)可見豐富的細(xì)胞器。他汀對照組鏡下亦大部分神經(jīng)元均正常。模型組神經(jīng)元大部分神經(jīng)元衰退，細(xì)胞固縮，胞核橢圓形，細(xì)胞內(nèi)高爾基體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)均腫脹，線粒體基質(zhì)呈低電子密度，細(xì)胞質(zhì)基質(zhì)呈高電子密度，胞質(zhì)中充滿核

7、糖體。膠質(zhì)細(xì)胞比正常組多，胞質(zhì)內(nèi)可見髓樣體。他汀治療組與模型組相比，神經(jīng)元損傷較輕，衰退神經(jīng)元較少，膠質(zhì)細(xì)胞較少。 3.免疫組織化學(xué)染色法檢測大鼠海馬區(qū)炎性因子IL-1 β、IL-6、TNF-α的表達(dá)模型組與對照組比較，三種炎性因子IL-1 β、IL-6、TNF-α陽性細(xì)胞較多，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；他汀治療組與模型組比較，上述種炎性因子陽性細(xì)胞減少，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；對照組和他汀對照組海馬區(qū)細(xì)胞IL

8、-1 β，IL-6，TNF-α陽性細(xì)胞均較少，兩者差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論： 1.他汀對照組與對照組結(jié)果均無顯著差異，阿托伐他汀本身對正常腦組織無特殊作用。 2.大鼠AD模型給予阿托伐他汀治療后，光鏡及電鏡下海馬區(qū)的神經(jīng)細(xì)胞損傷均減輕，膠質(zhì)細(xì)胞增生減少，學(xué)習(xí)及記憶能力明顯改善。 3.經(jīng)阿托伐他汀治療后，術(shù)后6小時(shí)時(shí)大鼠AD模型海馬區(qū)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α分泌明顯減少，模型組與他汀治療組1