阿托伐他汀對Aβ-,1-42-誘導AD大鼠模型抗炎作用的研究.pdf

1、目的：探討阿托伐他汀對β淀粉樣蛋白1-42(β-amyloid 1-42，Aβ1-42)誘導阿爾茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)大鼠模型的抗炎作用。通過研究阿托伐他汀對AD大鼠模型的認知功能障礙，海馬組織形態(tài)改變及海馬區(qū)炎性因子(IL-1β、IL-6、TNF-α)的產生等方面的保護作用，從抗炎方面闡明阿托伐他汀神經保護作用的機制。 方法： 選用健康雄性Wistar大鼠60只，體重250g-300g

2、，將其完全隨機分為四組：對照組15只，模型組15只，他汀對照組15只和治療組15只。模型組和治療組采用側腦室注射Aβ的方法制備大鼠癡呆模型-用無菌生理鹽水將Aβ1-42(sigma產品)溶解稀釋至5ug/ul，37℃孵育72h，使其變?yōu)榫奂瘧B(tài)的Aβ1-42。通過立體定向儀向大鼠左側腦室注入聚集態(tài)的Aβ1-422ul。對照組和他汀對照組大鼠側腦室內注射無菌生理鹽水2ul。他汀對照組和治療組給與阿托伐他汀5mg/kg/d灌胃三周，對照組和模

3、型組以生理鹽水為對照。 三周后行側腦室注射制作動物模型，術后取6h、1周兩個時間點，麻醉大鼠，生理鹽水及4％多聚甲醛進行心內灌注，取腦，制作病理標本，免疫組織化學方法測定海馬區(qū)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表達，HE染色觀察海馬區(qū)形態(tài)結構的變化，尼氏染色觀察神經元凋亡。術后1周各組取一只大鼠，麻醉后取新鮮腦組織，制作電鏡標本，透射電鏡觀察海馬區(qū)神經元和小膠質細胞超微結構的變化。術后第21天，各組進行Morris水迷宮

4、訓練5天，記錄成績，觀測大鼠的認知功能變化。 結果： 1.阿托伐他汀對大鼠認知能力的影響進行Morris水迷宮訓練過程中，各組大鼠逃避潛伏期逐漸縮短，記錄第5d的成績，統(tǒng)計學處理后發(fā)現(xiàn)，模型組較對照組逃避潛伏期明顯延長(41.3±3.4s)，撤離平臺后在原平臺象限內游泳的時間占整個游泳時間的百分比顯著降低(21.20±1.28％)，穿過原平臺位置的次數(shù)明顯減少(3.6±1.517)，具有顯著性差異(P<0.01)；治療組

5、與模型組相比較，逃避潛伏期縮短(15.7±1.6s)，撤除平臺后治療組大鼠在原平臺象限內游泳時間百分比升高(38.80±2.59)，穿過平臺位置的次數(shù)增多(7.2±1.789)，且差異具有顯著性(P<0.01)；他汀對照組與對照組比較，差異無顯著性。 2.各組大鼠海馬區(qū)組織病理及超微結構觀察HE染色：術后1周對照組海馬神經細胞呈橢圓形，排列整齊緊密，染色均一，細胞核圓且大，核仁清晰。模型組海馬神經細胞層次明顯減少，細胞排列稀疏，

6、細胞核深染、固縮為三角形或多角形，大量膠質細胞增生。他汀治療組海馬神經細胞排列較模型組整齊，細胞呈圓形或橢圓形，核仁清晰，細胞脫失較少見，反應性膠質細胞減少明顯減輕。 超微電鏡：對照組大部分神經元結構正常，胞核常染色質為主、核圓，細胞內可見豐富的細胞器。他汀對照組鏡下亦大部分神經元均正常。模型組神經元大部分神經元衰退，細胞固縮，胞核橢圓形，細胞內高爾基體及內質網均腫脹，線粒體基質呈低電子密度，細胞質基質呈高電子密度，胞質中充滿核

7、糖體。膠質細胞比正常組多，胞質內可見髓樣體。他汀治療組與模型組相比，神經元損傷較輕，衰退神經元較少，膠質細胞較少。 3.免疫組織化學染色法檢測大鼠海馬區(qū)炎性因子IL-1 β、IL-6、TNF-α的表達模型組與對照組比較，三種炎性因子IL-1 β、IL-6、TNF-α陽性細胞較多，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；他汀治療組與模型組比較，上述種炎性因子陽性細胞減少，差別有統(tǒng)計學意義(P<0.01)；對照組和他汀對照組海馬區(qū)細胞IL

8、-1 β，IL-6，TNF-α陽性細胞均較少，兩者差別無統(tǒng)計學意義。 結論： 1.他汀對照組與對照組結果均無顯著差異，阿托伐他汀本身對正常腦組織無特殊作用。 2.大鼠AD模型給予阿托伐他汀治療后，光鏡及電鏡下海馬區(qū)的神經細胞損傷均減輕，膠質細胞增生減少，學習及記憶能力明顯改善。 3.經阿托伐他汀治療后，術后6小時時大鼠AD模型海馬區(qū)炎性因子IL-1β、IL-6、TNF-α分泌明顯減少，模型組與他汀治療組1